マシャド・ジョセフ病遺伝子産物の結合タンパク解析による分子病態解明の研究

通过分析基因产物的结合蛋白阐明马查多-约瑟夫病的分子病理学研究

• 批准号: 17590858
• 负责人: 吉澤 利弘
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17590858/
• 关键词: ポリグルタミン病; マシャド・ジョセフ病; 神経細胞死

ポリグルタミン病の一つであるマシャド・ジョセブ病における神経細胞死選択性と細胞死に至る分子病態の両者にアプローチすることを目的としてyeast two hybrid法を用いたataxin-3結合タンパクの探索を行った。具体的にはataxin-3のN末側286残基をbaitとしてヒト脳のcDNAライブラリーをスクリーニングした。その中で、特に結合の強かったクローンを選別し、そのシークエンスを決定したところ、グリシンの代謝に関係する酵素をコードしていることが明らかになった。このクローン(以下YF156と略称)は、yeast two hybrid法で観察するかぎりataxin-3のN末のみならず全長とも結合し、またataxin-3のポリグルタミン鎖が10個の時のみならず77個の時も同様な結合を示した。また一連の欠失実験から、YF156はそのN末側にミトコンドリア移行シグナルを有し、その部分がataxin-3の最もN末側と結合しているものと考えられた。さらにYF156のN末側にFLAG tagをつけたタンパクとataxin-3(Q10/77)を同時にHEK293細胞に発現させてFLAG抗体にて免疫沈降した場合、実際にataxin-3が免疫沈降してくることから、哺乳動物の細胞内でもYF156とataxin-3(Q10/77)全長が結合することが示された。この結合がどのような意義を有するのかを検討するために、培養細胞内でのYF156とataxin-3(Q10/77)の共発現の実験を行った。その結果、ataxin-3(Q77)のみがYF156の細胞内分布を変化させる可能性が明らかとなり、これが分子病態に関わっているのではないかと現在予測している。(これらの成果はいずれも投稿準備中。)

The two hybrid methods were used to explore the effects of ataxin-3 on the development of neurodegenerative diseases. Specifically, the 286 residue on the N-terminal side of ataxin-3 was baited and the cDNA sequence was changed. In addition, the selection and determination of the metabolic relationship between the two enzymes are also discussed. YF156 is a hybrid method for detecting the total length of the N terminal of ataxin-3 and combining the N terminal of ataxin-3 with the total length of 10 terminals and 77 terminals. YF156 has a long history of missing N terminal side, and its part is ataxin-3 and its N terminal side is combined with YF156. The FLAG tag on the N-terminal side of YF156 and ataxin-3 (Q10/77) were also detected in HEK293 cells, and the full-length binding of YF156 and ataxin-3(Q10/77) was detected in mammalian cells. The co-occurrence of YF156 and ataxin-3(Q10/77) in cultured cells was carried out. The results show that the intracellular distribution of ataxin-3(Q77) and YF156 is likely to change, and the molecular pathology is now predicted. (The results are in preparation.)

项目成果

Choreaで発症し、抗VGKC抗体陽性を認めた膀腫瘍性神経症候群が疑われる1例

一例疑似膀胱肿瘤神经综合征，患有舞蹈病，抗 VGKC 抗体呈阳性

• 发表时间: 2005
• 期刊: 運動障害 13
• 作者: 大越教夫;石井亜紀子;渡邊雅彦;中馬越清隆;望月昭英;吉澤利弘;庄司進一
• 通讯作者: 庄司進一

Ectoine alters subcelluar localization of inclusions and reduces apoptotic cell death induced by the truncated Machado-Joseph disease gene product with an expanded polyglutamine stretch.

四氢嘧啶改变内含物的亚细胞定位，并减少由截短的马查多-约瑟夫病基因产物和扩展的聚谷氨酰胺片段诱导的细胞凋亡。

• 期刊: Neurobiology of Disease (in press)
• 作者: Furusho K;Yoshizawa T;Shoji S
• 通讯作者: Shoji S

A novel GRPase, CRAG, mediates PML-associated nuclear body formation and degradation of expanded polyglutamine protein

一种新型 GRP 酶 CRAG 介导 PML 相关核体形成和扩展多聚谷氨酰胺蛋白的降解

• 发表时间: 2006
• 期刊: J Cell Biol (in press)
• 作者: Qin Q;Inatome R;Hotta A;Kijima M;Yamamura H;Hirai H;Yoshizawa T;Tanaka H;Fukami K;Yanagi S
• 通讯作者: Yanagi S

MRミエログラフィーが漏出部位推定に有用であった特発性髄液圧症候群の1例

磁共振脊髓造影有助于估计渗漏部位的特发性脑脊液压力综合征一例

• 发表时间: 2005
• 期刊: 日本内科学会雑誌 94
• 作者: 上野卓教;吉澤利弘;町野 毅;庄司進一;阿武 泉
• 通讯作者: 阿武 泉