The development of the novel genetherapy to enhance the radiation sensitivity.

开发新型基因疗法以增强放射敏感性。

• 批准号: 17591250
• 负责人: NIMURA Yoshinori
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Chiba Cancer Center (Research Institute)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17591250/
• 关键词: Radiation sensitivity; Genetherapy

I)目的放射線を照射すると、細胞内DNAの二重鎖結合に損傷が発生し、その修復には主に非相同性末端結合(NHEJ : Non-Homologous End Joining)が関与している。NHEJで働く蛋白、Ku80を欠損した細胞株では、二重鎖結合損傷を修復することができず、放射線感受性が増加する。そこで、腫瘍細胞内のKu80発現をsiRNAで選択的に抑えた後に放射線を照射し、腫瘍の種類および照射後生存率に関係なく放射線感受性を増強させられるか、検討した。放射線治療の有効性を高めること、また照射法の工夫による放射線治療適応拡大が研究の目的である。II)H17年度の結果7種類の癌細胞株(肺癌、食道癌、膵臓癌、前立腺癌、子宮頸癌)にKu80siRNAを導入し、ウエスタンブロットにてKu80蛋白発現抑制を確認した。Ku80siRNA導入後の放射線照射による生存率の検討では、Ku80siRNAを導入すると、元の親株より2Gy照射後の生存率が、10-26%減少した。γ-R2AX染色の結果から、Ku80siRNA導入後に放射線を照射すると、放射線照射単独よりγ-H2AX染色陽性細胞の比率が高く、したがって、生存率の減少はDNA損傷の修復障害であることが証明された。III)H18年度の結果肺癌細胞株H1299の腫瘍細胞をヌードマウス皮下に移植し、生育した腫瘍にKu80siRNAを局注後、放射線照射を施行した。1回導入、1回照射の系では、照射後6日まで腫瘍縮小傾向を認め、以後は増大傾向に転じた。腫瘍縮小率を無治療群と比較すると、Ku80siRNAを局注した群の腫瘍縮小率は56%と最も大きく、放射線単独群の72%よりも放射線感受性の増強が見られた。また、2回導入、5回連日照射の系では、照射後32日の腫瘍体積は放射線単独群の56%であり、腫瘍の増殖抑制効果が見られた。腫瘍内のKu80発現をsiRNAで抑制し放射線を照射すると、腫瘍の放射線感受性が増強し、腫瘍増殖抑制効果がみられることがin vitro、in vivoで確認された。Ku80siRNAと放射線照射を用いた合併療法は、放射線治療有効性の向上に寄与する可能性が示唆された。

I) Damage caused by double-lock binding of DNA in cells during irradiation with target radiation, and repair of DNA damage caused by non-homologous end joining (NHEJ) are related to the development of DNA damage. NHEJ cells with defective protein and Ku80 were repaired by double lock binding damage and increased radiosensitivity. Ku80 siRNA expression in tumor cells was related to the increase of radiation sensitivity after irradiation, tumor type and survival rate after irradiation. Radiation therapy has a high efficiency, radiation therapy time, radiation therapy is suitable for large research purposes. II) Results of H17 7 7 types of cancer cell lines (lung cancer, esophageal cancer, breast cancer, prostate cancer, cervical cancer) Ku80 siRNAs were introduced and Ku80 protein expression inhibition was confirmed. The survival rate of Ku80 siRNA introduced into the parent plants after radiation irradiation decreased by 10-26% compared with Ku80 siRNA introduced into the parent plants after 2 Gy irradiation. The results of γ-H2AX staining showed that the percentage of γ-H2AX staining positive cells after radiation irradiation was higher than that after Ku80 siRNA introduction, and the survival rate was reduced. III) Results of H18 Lung cancer cell line H1299 was transplanted subcutaneously and irradiated with Ku80 siRNA. The tumor size tended to decrease 6 days after irradiation, but increased 6 days after irradiation. Tumor reduction rate was 56% compared with no treatment group, Ku80 siRNA was the highest in the treatment group, and 72% in the radiation group. 56% of tumor volume and tumor growth inhibition were observed 32 days after irradiation. Ku80 siRNAs in tumors inhibit radiation exposure, tumor radiosensitivity increases, tumor growth inhibition effects increase, and tumor growth inhibition is confirmed in vitro and vivo. Ku80 siRNA and radiation irradiation combined therapy, radiation therapy has an effect on the upward direction of the possibility of this.

项目成果

Silencing Ku80 using small interfering RNA enhanced radiation sensitivity in vitro and in vivo.

• DOI: 10.3892/ijo.30.6.1477
• 发表时间: 2007-06
• 期刊: International journal of oncology
• 影响因子: 5.2
• 作者: Y. Nimura;T. Kawata;K. Uzawa;Junko Okamura;Cuihua Liu;M. Saito;H. Shimada;N. Seki;A. Nakagawara;Hisao Ito;T. Ochiai;H. Tanzawa