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コウモリコロナウイルスのリスク評価ならびに高感度ウイルス検出法の開発に資する研究

有助于蝙蝠冠状病毒风险评估和开发高灵敏度病毒检测方法的研究

基本信息

批准号：
22H02521
负责人：
渡辺登喜子
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

コウモリは、コロナウイルスの自然宿主の一つであるため、コウモリが保有するコロナウイルスのサーベイランスは、将来的に発生しうる人獣共通感染症の予測のためにも重要である。コロナウイルス遺伝子を検出する方法として、RT-PCR法と次世代シークエンス法が用いられているが、それぞれ、特異的なウイルス遺伝子しか検出できない、あるいは感度が低いといった問題がある。そこで本研究では、コロナウイルスを網羅的かつ高感度に検出するために、バイオインフォマティクス解析によって設計した縮重プライマーを用いたRT-PCR法の確立を試みた。バイオインフォマティクス解析によって、データベースに登録されている数百種類のコロナウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼ遺伝子配列に対する39種類の縮重プライマーを設計した。これらのプライマーペアを用いて、RT-PCRの条件設定を行ない、最適なプライマー濃度、アニーリング温度、PCR酵素等を決定した。最適化した条件下で、アルファコロナウイルス、ベータコロナウイルス、ガンマコロナウイルス、デルタコロナウイルスから抽出したRNAを用いてRT-PCRを行ったところ、目的のサイズである400から450bp付近にバンドが検出された。以上、本研究では、縮重プライマーを用いて、コロナウイルス遺伝子を包括的に検出できるRT-PCR法を確立した。現在、本手法が野外サンプルに対しても有効であるかを検証するために、アフリカ・シエラレオネで採取したコウモリ臓器から抽出したRNAを用いて、コロナウイルスゲノムの検出を試みている。

It is important to predict the future occurrence of human infectious diseases. RT-PCR and the next generation PCR method are used in the detection of the virus. This study was conducted to establish the RT-PCR method for the detection of high sensitivity. The RNA dependent RNA sequences of hundreds of different types of DNA were designed for 39 different types of DNA sequences. The conditions for RT-PCR, such as the optimal concentration, temperature and PCR enzyme, are determined. Under the optimized conditions, RT-PCR was used to extract RNA from the target RNA. The target RNA was extracted from the target RNA by RT-PCR. The target RNA was extracted from the target RNA by RT-PCR. In this study, RT-PCR was established to detect and detect the presence of DNA. Now, this method can be used to extract RNA from wild animals.

项目成果

期刊论文数量（22）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

SARS-CoV-2に対する抗ウイルス活性を有する海洋天然物の探索と作用機序解明

寻找具有抗SARS-CoV-2病毒活性的海洋天然产物并阐明作用机制

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
安齋　樹;岩崎　有紘;小野　慎子;鳥居　志保;松浦　善治;末永　聖武;渡辺　登喜子
通讯作者：
渡辺　登喜子

新型コロナウイルスの懸念される変異株の出現

新型冠状病毒变异毒株的出现

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
インフルエンザ：その他の呼吸器感染症
影响因子：
0
作者：
Kiyotada Naitou;Honoka Iwashita;Hiromi H Ueda;Mitsuya Shiraishi;Yoshikazu Fujimoto;Kazuhiro Horii;Tomoya Sawamura;Takahiko Shiina;Yasutake Shimizu;渡辺登喜子
通讯作者：
渡辺登喜子

ハムスターモデルにおける新型コロナウイルスの少量感染系の確立

新型冠状病毒仓鼠模型小规模感染体系的建立