新規direct-cKOシステムでの必須遺伝子探索とその網羅的解析基盤の構築

利用新的direct-cKO系统寻找必需基因并构建综合分析平台

• 批准号: 22H02535
• 负责人: 水野 聖哉
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02535/
• 关键词: ゲノム編集; モデルマウス開発; 必須遺伝子; 遺伝子改変マウス

生存や増殖という最も重要で基礎的な生命イベントの基本原理を理解するためには必須遺伝子の特定が欠かせない。多細胞生物は、形態や役割が異なる非常に多くの細胞種同士が緊密に協調し、その生命体を構成・維持するが、各細胞種間で必須遺伝子がどの様に異なるのかは不明である。各細胞種におけるそれぞれの細胞必須遺伝子の特定は、多細胞生物の生命維持機構の基本原理の理解に直結する。しかし、解析の困難性から、in vivoでの網羅的な必須遺伝子探索はほとんど実施されていない。そこで、「マウス成体の各組織での細胞必須遺伝子の特定を可能とする実験リソース及び解析系を確立」を目的とする研究を行った。まず、必須遺伝子の候補リストを公開されているマウスゲノムデータベースから抽出したところ、その遺伝数は190であった。次にこれらの遺伝子をそれぞれ破壊できるベクターの構築を行った。その結果、177種類のベクターをそれぞれ個別に構築することに成功した。そのうちのいくつかについて、実際に遺伝子破壊をする能力があるのかを培養細胞にて確認したところ、確認したすべてのベクターが破壊活性を有していた。また、ここで構築した全種類のベクターには赤色蛍光タンパク遺伝子も搭載させた。次に上述のベクターを導入する遺伝子改変マウスの確立を行った。このマウスは、標的とする内在性遺伝子破壊が生じていない細胞でだけEGFPが発現する遺伝子カセットを持つ。3種類の遺伝子改変マウスを確立し、その破壊および蛍光タンパク発現活性を評価した結果、一系統が有望な結果を示した。

Survival and reproduction are the most important and basic basic principles of life. To understand the basic principles of life, we must leave the specific ones behind. Multicellular organisms are very different in form and have many different types of cells. They are closely coordinated and closely coordinated. They are very lifelike. The structure and maintenance of the body are unknown, and the differences between each cell species are unknown. The specificity of each cell species and the basic principles of the life support mechanism of multicellular organisms must be understood and understood.しかし、The difficulty of analysis から、The in vivo でのNET must be explored はほとんど実事されていない. "It is possible to establish specific cells in each tissue of the adult body and analyze the system."まず、Alternate candidate for the must-have child, リストを, is open to the public.ータベースからdraw out したところ, その缝数は190であった. The second にこれらの缝子をそれぞれ波壊できるベクターのconstruct を行った.そのRESULTS, 177 types of のベクターをそれぞれ individually built することにsuccessful した.そのうちのいくつかについて、実记に伝子波壊をするabilities があるのかをcultivation The cells are confirmed to be active and the destructive activity of the cells is confirmed to be the same. All types of また, ここでconstructed したのベクターにはred 荍光タンパク 伝子も equipped with させた. The above-mentioned のベクターを introduction する伝子 changed the 変マウスのestablished を行った.このマウスは, the target とする internal nature left 伝子棊が生 じていない cells でだけEGFP が発 appear する伝子 カセットをhold つ. Three types of の缝子开変マウスをestablishedし,そのbreaking壊および蛍光タンパク発existing active results, and a system of promising resultsをshowsした.