Transport mechanisms of cell-penetrating peptides at the blood-retinal barrier to establish strategies of macromolecular drug delivery

细胞穿透肽在血视网膜屏障上的转运机制，以建立大分子药物递送策略

基本信息

批准号：
22H02780
负责人：
赤沼伸乙
金额：
$ 11.15万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度においては血液網膜関門 (BRB) における細胞膜透過ペプチド (CPP) 輸送機構が高分子の網膜デリバリーに有用であることの実証に向けた研究を推進した。毛細血管内皮細胞にて構成される内側血液網膜関門 (inner BRB) を対象として、内皮細胞における透過性を示すCPPであるangiopep-2について詳細な輸送特性解析実施に向けて、緑色蛍光タンパク質 (GFP) や5/6-carboxyfluorescein (FAM)、そして125Iにてそれぞれ標識したangiopep-2の合成に成功した。その中で、GFPにて標識したangiopep-2についてマウスへ静脈内投与後、網膜組織内においてGFP由来のシグナルが検出された。このシグナルはangiopep-2標識されていないGFP投与時には観察されなかったことから、GFPへのangiopep-2付加は網膜へのGFP移行性を高めることが示唆された。この網膜移行性向上にinner BRBが関わるかを、我々が新たに確立した多細胞性in vitro実験系、inner BRBスフェロイドを用いて解析を行った結果、GFP標識angiopep-2およびFAM標識angiopep-2共に担体介在型にてinner BRBを透過することが示され、この担体介在型輸送はGFPおよびFAMでは見られなかった。従って、inner BRBにおいてangiopep-2付加分子を認識する輸送機構が存在することが示唆された。本成果の一部はJ. Control. Releaseへ原著論文として投稿しており、本実績報告書提出時において、すでに受理・掲載済みである (J. Control. Release, 8-21 (2022))。

在2022财年中，促进了研究以证明细胞膜可渗透肽（CPP）转运机制在血液视网膜屏障（BRB）中用于视网膜视网膜递送大分子。为了对AngiOpep-2进行详细的传输表征分析，AngiOpep-2（一种在内皮细胞中表现出渗透性的CPP），我们成功地合成了用绿色荧光蛋白（GFP），5/6-羧基氟氟氟塞氏素（FAM）和125i的angiOpep-2，分别在Mential Brylial brolial capirolt cap中，是cap的cap cap cap，cap cap cap cap cap cap cap cap cap cap，均为125i。其中，在静脉注射给小鼠的AgiOpep-2静脉注射后，在视网膜组织中检测到源自GFP的信号。当没有AngiOpep-2标记的GFP给药时，未观察到该信号，这表明在GFP中添加AngiOpep-2会增强GFP转移到视网膜上。我们分析了内部BRB是否通过使用内部BRB球体（一种新建立的多细胞体外实验系统）参与改善视网膜迁移，并发现GFP标记的AngiOpep-2和Fam-Bail-labipepepep-2使用载体介导的类型和这种载体介导的类型的运输均未在GFF中渗透。因此，有人提出有一种运输机制可以识别内BRB中的AngiOpep-2添加分子。其中一些结果已作为J. Control提交给原始论文。发行，并在提交此成就报告时已被接受和发表（J. Control。版本，8-21（2022））。