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Elucidation of the universal aggravation mechanisms caused by emerging viruses focusing on small viral RNAs

阐明以小病毒RNA为重点的新兴病毒引起的普遍加重机制

基本信息

批准号：
22H02879
负责人：
渡邊洋平
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

培養細胞を用いた感染実験により、新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）は季節性コロナウイルス（HCoV-OC43及び229E）と同様に効率的にヒト細胞で増殖する一方ｄえ、SARS-CoV-2のみが感染後期にIFN産生を誘導する事象を見出した。ウイルス感染細胞から精製したRNA分画を細胞導入したところ、SARS-CoV-2感染細胞を由来とするsmall RNA分画のみがIFN誘導能を示したため、このRNAの同定を試みた。small viral RNA（svRNA）を効率的に解読するRNA-seq法を構築することで、HCoVと異なり、SARS-CoV-2がウイルスゲノムRNAの5’末端断片（5’ end svRNA）を大量に産生することが分かった。5’ end svRNAは、5’ triphosphateと末端63塩基によるRNA2次構造の存在によってRIG-Iを刺激していた。ヒト気道再構築モデルを用いたex vivo感染実験により、OC43と異なり、SARS-CoV-2が感染後期に5’ end svRNAを蓄積させてIFN応答を惹起することを明らかにした。また、SARS-CoV-2変異株間で5’ end svRNA産生量に相違があり、これは臨床的に報告されているウイルス病原性の違いと一致した。5’ end svRNAがウイルス複製に機能を持つのか評価するために、実験的な補完実験をおこなった。その結果、細胞内の5’ end svRNA量を100倍以上に増加させてもSARS-CoV-2 RNA複製量は変化しなかった。このことから、5’ end svRNAはウイルス複製自体を制御する役割はなく、異常なRNA複製の副産物として蓄積すると推察された。

The culture cells were infected with virus infection, new-type virus infection (SARS-CoV-2), seasonal infection (HCoV-OC43 and 229E), the same rate of infection (HCoV-OC43 and 229E), and that of IFN after infection. The cause of infection is that the cells infected with RNA are divided into cells, and the cells infected with SARS-CoV-2 are divided into cells. The reason why the cells infected with SARS-CoV-2 is that the IFN guide can show that the cells are positive and the RNA is the same as the test. The resolution of the small viral RNA (svRNA) rate is based on the RNA-seq method, the HCoV method, the SARS-CoV-2 method, the RNA 5' end fragment (5' end svRNA), a large number of samples. At the end of 5 'end svRNA and 5' triphosphate, there are some RIG-I stimuli at the end of 63 'RIG-I. After the infection of ex vivo, OC43 infection and SARS-CoV-2 infection, the post-infection period of 5 'end svRNA was stored and IFN was answered. The reports on the production of 5 'end svRNA among strains of bacteria and SARS-CoV-2 strains were consistent with each other. The 5' end svRNA transmission copy machine is capable of maintaining the performance of the computer after the completion of the operation. The results showed that the amount of intracellular 5 'end svRNA was more than 100 times higher than that of intracellular SARS-CoV-2 RNA replication. You need to make a copy of your own system. You need to make a copy of yourself. You need to make a copy of the RNA. You need to make a copy of it.