病態を再現するヒト肝臓オルガノイドの創成と肝星細胞脱活性化をめざした細胞種間解析

点击翻译按钮获取中文摘要

申請者らは肝癌の形成には肝線維化や脂肪化、および宿主ゲノムへのウイルス遺伝子挿入が関連することを明らかとしてきた。しかし、後天的遺伝子異常が蓄積した肝細胞と、線維化等を担い肝微小環境を構成する各種細胞との細胞連関については未だ不明な点が多い。そこで本研究では、ヒト病態を忠実に再現するモデルを開発し、病態形成に関わる肝構成細胞の細胞連関の詳細を明らかとすることを目的として、以下の研究を実施した。1)生理的肝細胞の形質を保持しかつ長期培養可能な培養体はこれまで存在しなかったが、ヒトiPS細胞における種々の培養条件の探索を行った結果、肝細胞の形質を保持しつつ長期培養可能な肝細胞オルガノイドの培養法を見出した。得られたオルガノイド培養体について、電子顕微鏡を用いた形態学的解析やシングルセルRNAシークエンス等をおこない、その形質を詳細に分析した。2)さらに、これらにおいて後天的遺伝子変異や病態負荷を加えることにより疾患を忠実に再現するモデルを構築することを目的として、ヒトiPS細胞におけるゲノム編集により、臨床検体で認められたゲノム情報を再現する遺伝子改変ヒトiPS細胞を樹立した。遺伝子改変ヒトiPS細胞を肝細胞系譜細胞に分化させた場合における増殖能やそのシグナル伝達系に関わる形質の変化を詳細に解析した結果、導入したゲノム要因ががん化の初期段階に関わる機序を明らかとした。3)さらに、これらを用いて肝組織を一部模倣しうる培養体を作製するために、ヒトiPS細胞を起点とした肝星細胞の誘導法を開発し、活性化状態などの形質解析を行った。