臨床応用へ向けた人工皮膚付属器誘導細胞移植法の開発

皮膚創傷部位やその後の瘢痕、禿髪に対して、皮膚付属器を伴う皮膚再生を実現することは、無毛・乏毛・乾皮症の根本的な解決となる新しい治療法となりうる。我々は、マウス成体由来の上皮・間葉系細胞に特定の遺伝子群を遺伝子導入することによって「成熟した毛髪を含む皮膚付属器の再構成能を与える方法」の開発に成功してきた。本研究では、この技術をヒト細胞に応用するべく、研究を進めている。臨床応用を想定して、成人皮膚由来細胞に対する毛包・皮膚付属器誘導能付与方法の開発を進めるため、市販されているヒト成人由来ケラチノサイト、ヒト成人由来脂肪由来間葉系細胞、ヒト成人由来線維芽細胞を用いた検討を行った。それぞれ培養条件下に、レトロウイルスベクターを用いて、既に同定している皮膚付属器再構成能・再生能・誘導能を付与するための遺伝子セットについて遺伝子導入を行ったのち、ヌードマウスの背部に装着したシリコンチャンバー内に混合移植した。マウスの免疫応答によりヒト細胞の生着が拒絶されたため、より免疫能の低いNod-SKIDマウス、さらにNSGマウスに変更した。また、遺伝子導入効率を向上させるため、薬剤選択を併用したレンチウイルスベクターに変更し遺伝子導入を行った。今のところ組織切片による組織学的形状評価ではヒト細胞による発毛の証明には至っていないが、その一方で、ヒト細胞の検出法として、抗ヒト核抗体や抗ヒトミトコンドリア抗体を用いて様々なヒト免疫組織化学染色の手法を検討・最適化を行い、精度の高い検出法を確立している。

皮膚創傷部位やその後の瘢痕、禿髪に対して、皮膚付属器を伴う皮膚再生を実現することは、無毛・乏毛・乾皮症の根本的な解決となる新しい治療法となりうる。我々は、マウス成体由来の上皮・間葉系細胞に特定の遺伝子群を遺伝子導入することによって「成熟した毛髪を含む皮膚付属器の再構成能を与える方法」の開発に成功してきた。本研究では、この技術をヒト細胞に応用するべく、研究を進めている。臨床応用を想定して、成人皮膚由来細胞に対する毛包・皮膚付属器誘導能付与方法の開発を進めるため、市販されているヒト成人由来ケラチノサイト、ヒト成人由来脂肪由来間葉系細胞、ヒト成人由来線維芽細胞を用いた検討を行った。それぞれ培養条件下に、レトロウイルスベクターを用いて、既に同定している皮膚付属器再構成能・再生能・誘導能を付与するための遺伝子セットについて遺伝子導入を行ったのち、ヌードマウスの背部に装着したシリコンチャンバー内に混合移植した。マウスの免疫応答によりヒト細胞の生着が拒絶されたため、より免疫能の低いNod-SKIDマウス、さらにNSGマウスに変更した。また、遺伝子導入効率を向上させるため、薬剤選択を併用したレンチウイルスベクターに変更し遺伝子導入を行った。今のところ組織切片による組織学的形状評価ではヒト細胞による発毛の証明には至っていないが、その一方で、ヒト細胞の検出法として、抗ヒト核抗体や抗ヒトミトコンドリア抗体を用いて様々なヒト免疫組織化学染色の手法を検討・最適化を行い、精度の高い検出法を確立している。