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Elucidation of the molecular basis of oral-renal association by periodontal disease exosomes in exacerbation of diabetes and complications of nephropathy

牙周病外泌体阐明糖尿病恶化和肾病并发症中口腔-肾脏关联的分子基础

基本信息

批准号：
22H03302
负责人：
沢禎彦
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03302/
关键词：
糖尿病腎症エクソソーム SGLT2 TLR 歯周病糖尿病性腎症 P. gingivalis F. nucleatum 歯周疾患

项目摘要

本研究は歯周病を有する糖尿病環境の口腎エクソソーム連関による腎症と糖尿病増悪の分子機構の解明を目的とする。すなわち、糖尿病腎糸球体・尿細管では、歯周病感染組織エクソソームの内包する炎症・病原性因子に高血糖刺激で発現の亢進した細胞内受容体が過剰応答することで糸球体の慢性炎と硬化症が促進し尿細管間質性炎を誘発、SGLT2過剰発現による糖尿病増悪連鎖が合して複雑系を形成すること、TLRなど歯周疾患エクソソーム内包物受容体のSNPが腎症に至る責任遺伝子、すなわち腎症合併と糖尿病増悪連鎖の個人差の遺伝的背景となる仮説を分子疫学的に検証する。本年度は、ヒト・マウス口腔組織由来線維芽細胞・上皮細胞の歯周病原菌成分添加培養上清を収集し、超遠心分離、ポリマー沈殿、エクソソームマーカーCD9/CD63/CD81特異抗体を用いた免疫沈降法で培養細胞由来エクソソームを分離することができた。このエクソソームをヒト・マウス培養血管内皮細胞・近位尿細管細胞に投与、IFNβ/γ、TNFα、IL-6分泌量の増大、TLR7/8/9活性化信号の増加、およびNF-kB, IRF3など関連転写因子の核内移行を確認することができた。さらに、エクソソームcargo物質のマイクロフルイディック分析と核酸・蛋白マイクロアレイにて蛋白・microRNAを特定中である。また、Streptozotocin投与膵島β細胞破壊型I型糖尿病ICRマウス頬粘膜下に歯周病原菌成分を投与した腎症群のTLR7/8/9発現増大を確認することができた。さらには、収集したエクソソームを蛍光標識して糖尿病マウス尾静脈に投与後、蛍光標識エクソソームのマウス腎組織内分布を検索することができた。以上について現在論文執筆中である。

The aim of this study is to elucidate the molecular mechanisms involved in the development of diabetes mellitus and kidney disease. Diabetic nephropathy, urinary tubule infection, inflammation, pathogenic factors, hyperglycemic stimulation, increased intracellular receptors, and the formation of a diabetic linked complex system that promotes the development of urinary tubule interstitial inflammation, SGLT2, and the development of diabetes mellitus. SNPs in TLR peripheral diseases and inclusion receptors are responsible for kidney disease, kidney disease associated with diabetes mellitus, and individual differences. This year, the oral tissue derived from vascular germ cells and epithelial cells was added to the culture supernatant, and the ultra-central isolation, purification, and purification of CD9/CD63/CD81 specific antibodies were performed. The expression of IFNβ/γ, TNFα, IL-6, TLR7/8/9 activation signal, NF-kB, IRF3-related transcription factor in cultured vascular endothelial cells and proximal urinary tubule cells was confirmed. For example, protein analysis, nucleic acid analysis, protein analysis, and microRNA analysis. Streptozotocin administration confirmed an increase in the expression of TLR7/8/9 in patients with type 1 diabetes mellitus. In addition, it is necessary to investigate the distribution of diabetes mellitus in the tail vein. The above is now in the middle of writing the paper.