酵母人工染色体ベクタ-系を用いたハンチントン病原因遺伝子の単離とその構造解析

利用酵母人工染色体载体系统分离亨廷顿病致病基因及其结构分析

• 批准号: 03263226
• 负责人: 今井 高志
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03263226/
• 关键词: ハンチントン病; 神経変性疾患; 第4染色体; YAC

ハンチントン病(HD)は,常染色体優性遺伝形成を呈する神経変性疾患である。欧米での連鎖解析により、その原因遺伝子座は,第4番染色体短腕4p16.3のD4S125からD4S168に至る2.5Mbの領域にあると考えられている。一方,本邦家系に於いても,この領域内のDNAマ-カ-と疾患遺伝子間の連鎖が最も強い事が確認されている(D4S95:θ=0.00,LODスコア3.31)。そこで、本研究では,HD原因遺伝子を単離するために,まずこの2.5Mbの領域内にあるD4S95のDNAシ-ケンスよりプライマ-を合成し,PCR法によりYACライブラリ-のスクリ-ニングを行った。その結果,D4S95を含む2つのYACクロ-ン(yLIHー1:110kb,yLIHー2:840kb)を得た。YACクロ-ンよりアガロ-スプラグ法でDNAを調製し,レアカッタ-制限酵素(Not I,Nru I,Mlu I,BssH IIなど6種)により完全はたは,部分消化を行ない,パルスフィ-ルド電気泳動法とサザンブロッテング法により解析した。そのうちyLIHー1にCpGアイランドと思われる領域を2ケ所検出した。次にyLIHー1DNAをパルスフィ-ルド電気泳動を用いて精製しEcoR Iにて完全消化を行った。このDNAフラグメントをプラスミドに挿入しサブクロ-ン化した。得られた約50個のクロ-ンをそれぞれプロ-ブとしてZoo Blot Hybridizationを行い,種を越えて保存されている配列を含む3クロ-ンを同定した。今後はこの種を越えて保存されている配列をプロ-ブにしてヒト脳cDNAライブラリ-をスクリ-ニングしこの領域に存在する遺伝子を同定していく予定である。

Autosomal dominant gene formation is the result of neurodegenerative diseases. The genetic linkage locus of Omega is D4S125 and D4S168. The genetic linkage locus of Omega is D4S125 and D4S168. For one side, the linkage between DNA and disease genes in the Chinese family was most strongly confirmed (D4S95:θ= 0.00, LOD = 3.31). In this study,HD gene fragments were isolated and synthesized in a 2.5Mb domain using PCR. D4S95 contains two YAC files (yLIH 1:110kb, yLIH 2:840kb). YAC-100 The first is the first time that I've ever seen a woman. Eco I is a complete digest of DNA. The DNA of the virus was detected in the virus. About 50 species were identified in the Zoo Blot Hybridization process, and species were identified in the Zoo Blot Hybridization process. In the future, the species will be preserved in the same way as the cDNA sequence.