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多発性内分泌腺腫瘍症1型原因遺伝子の同定

鉴定导致 1 型多发性内分泌肿瘤的基因

基本信息

批准号：
04152131
负责人：
今井高志
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152131/
关键词：
癌抑制遺伝子ポジショナルクローニング MEN1 YAC STS エクソントラップ Zooブロット

项目摘要

多発性内分泌腺腫瘍症1型(MEN1)の原因遺伝子はリンケージ解析により11番染色体q13領域にマップされている。本研究ではこの範囲をコスミドとYACを用いてカバーし、それらのクローンからエクソントラップ法などを使って遺伝子を単離し、MEN1候補遺伝子を同定することを目的としている。まず、MEN1遺伝子座をカバーするYACクローンを単離するために、この領域にマップされたコスミドマーカーをSTSs(SequenceTagged-Sites)化した。これまでにq13領域において合計33個のSTSsを作成(マーカーDNAのシークエンス、PCRプライマーの合成、PCR条件の最適化)した。次に、これらSTSsを使ってCEPH及び我々の作成したYACライブラリーをPCR法によりスクリーニングした。その結果これまでに15サイトを含む9個のYACクローン(1クローンが複数のSTSsを含む)を得た。現在これらクローンをパルスフィールドゲル電気泳動法により解析中である。またq13領域に存在する遺伝子を同定するためにコスミド、YACより制限酵素切断断片を調製してスプライシングベクターpSPL1に組み込み、cos細胞に導入し、エクソンと思われる配列を回収(エクソントラップ)した。これまでに12個のエクソンと思われる断片を得た。さらに、3個のコスミドよりzooブロット法による哺乳動物間で保存されている配列の同定などにより150bp以上の長さをもったオープンリーディングフレームを得た。これら合計15個の遺伝子の一部と思われる配列を用いて、現在cDNAライブラリーのスクリーニングを行なっている。

Analysis of the cause of multiple endocrine neoplasia type 1 (MEN1) is based on the chromosome q13 domain of chromosome 11. This study uses the いてカバーし, それらのクローンからエクソントラップ法などを使って缝子を単里し, MEN1 candidate 缝子を同定することをpurposeとしている.まず、MEN1伝子杒カバーするYACクローンを単利するために、この区にマップされたコスミドマーカーをSTSs(SequenceTagged-Sites)化した.これまでにq13 field において total 33 STSsを made (マーカーDN Aのシークエンス, PCR プライマーの synthesis, optimization of PCR conditions)した.に, これらSTSsを use ってCEPH and び我々のしたYACライブラリーをPCR method によりスクリーニングした.そのRESULTS これまでに15サイトを有む9のYACクローン(1クローンがpluralのSTSsをcontainingむ)をgetた. Now we are analyzing the electrophoretic electrophoresis method of これらクローンをパルスフィールドゲル.またq13 field にexisting する伝子を同定するためにコスミド、YACよりlimited enzyme cutting fragment をmodulation してスプライシングベククターpSPL1 group み込み, cos cell introduction し, エクソンと思われるarray を recovery (エクソントラップ) した.これまでに12 pieces of のエクソンと思われる片を得た.さらに、3 のコスミドよりzoo ブロット法による mammals でSave されている arrangementの同定などにより 150bp or more long さをもったオープンリーディングフレームを得た.これらA total of 15 pieces of の伝子の一思われる配array いて, now cDNAライブラリーのスクリーニングを行なっている.