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鉄硫黄タンパク質の酸化環元電位制御機構の研究

铁硫蛋白氧化环电位控制机制研究

基本信息

批准号：
04225224
负责人：
三浦成敏
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kagawa Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、アミノ酸側鎖の作るアドレノドキシン活性部近傍の局所的な分子環境を遺伝子工学によるアミノ酸置換と核磁気共鳴法などの物志化学的手段と組み合わせることにより探査し、鉄-イオウタンパク質の酸化環元電基制御機構やアドレノドキシンが仲介する電子伝達機構を解明することを目的としている。遺伝子工学の手法を用いて、アドレノドキシンcDNAの大腸菌中での大量現系を作成した。環元酵素やシトクロムP-450とアドレドキシンの分子間相互作用におけるHis56残基の役割をより明かにすることを目的として、位置特異的変異導入法を用いて(H56R)、(H56A)変異体アドレノドキシンの調製を行い、それらの電子伝達活性及び分光学的特性を明らかにした。両者とも可視吸収スペクトルは野生型アドレノドキシンのそれと同等であったが、電子伝達機能には大きな違いが見られた。Cyt、c環元活性で見た環元酵素に対するKm値は、(H56R)では野生型の20倍、(H56A)では野生型より数倍高い値を示した。シトクロムP-450sccとの解離定数の測定においても同様な結果が得られた。プロトンNMRスペクトルを測定すると、Arg変異体ではTyr82を含むアロマチックシグナルに大きな変化が見られたが、Ala変異体のスペクトルは天然型のそれと余り変わらなかった。プロトンNMRスペクトルに現れたタンパク構造がArg変異体とAla変異体との機能的差異を生じていると考えられる。現在、(H56R)変異体の二次元NMRスペクトルの詳細な解析を行い、アミノ酸置換によって起こる構造変化の同定を行っている。これによりアドレノドキシンの電子伝達機構の構造化学的解明がなされるものと期待される。

In this study, the active part of the active part of Amin acid side-locking nuclease is close to the molecule. Environmental Science and Engineering Co., Ltd. Acid Substitution and Nuclear Magnetic Resonance Methodsみ合わせることによりExploration し、鄄-イオウタンパクquality のAcidified ring element electro-based control mechanismやアドレノドキシンが中文するElectronic 伝达 Institution を Explain することをPurpose としている. It is made using a technique based on the technique of the Yokanko Institute of Technology, using a large number of coliforms that are found in いて and アドレノドキシンcDNA. Cyclic enzyme やシトクロムP-450 とアドレドキシンの intermolecular interaction におけるHis56 residue の丒より明かにすることをpurpose として, position specific The variation introduction method is used for the variation of いて (H56R) and (H56A).ンのmodulation を行い, それらのelectron 伝reach activity and びspectroscopic properties を明らかにした.両人ともVisible absorption スペクトルは wild type アドレノドキシンのそれIt's the same thing, and it's the same electronic function as it is. Cyt, c ring-membered activity is not seen in the ring-membered enzyme, (H56R) is 20 times higher than the wild type, (H56A) is 20 times higher than the wild type, and is several times higher than the wild type. The determination of the dissociation number of the STOCK P-450scc is the same as the result of the dissociation number. NMR spectrometer NMR spectrometerル大きな変化が见られたが, Ala変variant のスペクトルはnatural type のそれと礉わらなかった.プロトンNMR スペクトルに出れたタンパク structure がArg 変 variant と Ala 変 variant との functional difference を生じていると卡えられる. Now, the (H56R) two-dimensional NMR of the different body is analyzed in detail, and the acid substitution of the acid substitution is made of structural change.これによりアドレノドキシンの电伝达Mechanism's structural chemistry explanation がなされるものとLooking forward to される.