チトクロ-ムPー450sccとその還元酵素系との反応メカニズムと結合部位の研究

细胞色素P-450scc与其还原酶系统反应机制及结合位点研究

• 批准号: 02217216
• 负责人: 原 孝之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nakamura Gakuen College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02217216/
• 关键词: アドレノドキシン還元酵素; アドレノドキシン; チトクロ-ムPー450scc; コレステロ-ル側鎖切断反応; 抗体; 高密度リポタンパク質; 酵素反応機構; タンパク質複合体

副腎皮質ミトコンドリアのステロイド水酸化酵素系を構成するアドレノドキシン還元酵素(AR)、アドレノドキシン(AD)及びチトクロ-ムPー450scc(Pー450scc)の反応メカニズムと構造との相関を研究するために、平成2年度は、精製したAR、AD、Pー450sccを用い、再構成系によるコレステロ-ル側鎖切断反応(SCC反応)のメカニズムについて検討した.先ず、本再構成系によるSCC反応の測定法について検討し、従来から広く用いられてきた ^<14>Cーコレステロ-ルを基質として用いる測定法によらず、非放射性コレステロ-ルから生じたプレグネノロンをコレステロ-ルオキシダ-ゼでプロゲステロンへ酵素的に変換させたのち、HPLCでプロゲステロンを分離定量する方法が再現性よく、測定も簡便であることを確認した.本法は、我々も独自に開発した方法であったが、北里大学の菅野らも本法を開発し、先に論文になったために公表できなかった.次に、上記方法を用いて、再構成系によるSCC反応に対するPー450sccの抗体阻害について検討した.Pー450sccの抗体、1gGフラクションを、NADPHと同時に加え20分反応させると、SCC反応は4〜5倍活性化されることがわかった.しかし、Pー450sccと抗体とだけを先に37℃で10分間反応させたのち、NADPHを加えると著しい反応阻害がみられることがわかった.これまでに我々は、アドレノドキシンの抗体を用いて、AR、AD、Pー450sccの3者が共存するときには、Pー450scc還元反応の阻害が妨害されることから、今回の実験結果も、複合体形成によるsteric hindranceの結果とも示唆される.次に、何故Pー450sccの抗体で活性化が起きるのか検討したところ、ウサギ1gGフラクションに含まれるリポタンパク質のコレステロ-ルがSCC反応を活性化させることを見い出した.特に、高密度リポタンパク質(HDL)にその活性化が強く、HDLとPー450scc、AD、ARとに複合体形成促進作用のあることを示唆するデ-タを得た.

Paradrenocortical cortex: A complete set of enzyme systems, including AR, AD, and P-450scc (P-450scc) and structure correlation research, Heisei 2 years, refined AR, AD, P-450scc, reconstruction system, side lock cut reverse (SCC reverse) and structure correlation research. The present invention relates to a method for determining SCC activity, which comprises the following steps: detecting SCC activity, and detecting SCC activity<14>. This law is open to the public. In addition, the method described above was used to reconstruct the system for SCC reaction, and the antibody resistance of P-450scc was investigated.P-450 scc antibody, 1gG antibody, NADPH and 20 minutes of SCC reaction were added simultaneously. P-450scc antibody was added at 37℃ for 10 minutes. The results of this study include: (1) the co-existence of AR, AD and P-450scc antibodies,(2) the inhibition of P-450scc antibodies,(3) the co-existence of AR, AD and P-450 scc antibodies,(4) the inhibition of P-450scc antibodies,(5) the inhibition of P-450scc antibodies,(6) the inhibition of P-450 scc antibodies, and (7) the inhibition of P-450 scc antibodies. In addition, why P-450scc antibody is activated, and why P-450 SCC antibody is activated, and why P-450 scc antibody is activated. Special, high density lipoprotein (HDL) in the activation of strong, HDL P-450SCC, AD, AR and complex formation promotion effect of the expression of the protein.

项目成果

Mikako Takeshima and Takayuki Hara: "Stimulation of Cholesterol Side Chain Cleavage Reaction in a Reconstituted System by Rat High Density LipoproteinーImplication of a Cluster Model in the Reactionー" Biochem.Intern.

Mikako Takeshima 和 Takayuki Hara：“大鼠高密度脂蛋白重构系统中胆固醇侧链裂解反应的刺激 - 簇模型在反应中的意义 -”Biochem.Intern。

Takayuki Hara and Toshiyuki Miyata: "Identification of a CrossーLinked Peptide of a Covalent Complex between Adrenodoxin Reductase and Adrenodoxin" J.Biochem.

Takayuki Hara 和 Toshiyuki Miyata：“肾上腺素还蛋白还原酶和肾上腺素还素之间共价复合物的交联肽的鉴定”J.Biochem。

Takayuki Hara and Toshiyuki Miyata: "Purification of a CrossーLinked Complex between Adrenodoxin and Cytochrome Pー450scc and Its Identification of a CrossーLinked Site" J.Biol.Chem.

Takayuki Hara 和 Toshiyuki Miyata：“肾上腺氧还蛋白和细胞色素 P-450scc 之间交联复合物的纯化及其交联位点的鉴定”J.Biol.Chem。