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大腸菌プリンヌクレオチド生合成系制御蛋白質PurRの構造と機能

大肠杆菌嘌呤核苷酸生物合成调控蛋白PurR的结构与功能

基本信息

批准号：
04254207
负责人：
三瓶嚴一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04254207/
关键词：
DNA結合蛋白質プリンヌクレオチド生合成系 Pur box

项目摘要

本研究は大腸菌プリンヌクレオチド生合成系の制御因子であるDNA結合蛋白質PurRの構造と機能の関係を明らかにすることを目的としている。本年度は、昨年度に引き続いてPurR蛋白質をコードするpurR遺伝子の発現制御機構の解析、さらにPruR蛋白質の効率の良い大量発現系を作成を行った。前者については、purR遺伝子中のPurboxがプリンヌクレオチド生合成系遺伝子の場合の比較して特異な位置に存在することから(プリンヌクレオチド生合成系遺伝子のPurboxがプロモーター近傍に存在するのに対して、purR遺伝子の場合は転写開始点の下流95bと183bに存在する)、purR遺伝子の自己制御が転写の開始の段階に働いているのか、それとも転写の伸長の段階に働いているのかを明らかにするために、ノザン・ハイブリダイゼーションにより転写産物の詳細な解析を行った。その結果、過剰のアデニンが存在する培地中で培養した菌より抽出したRNAは、アデニンが存在しない培地で培養した菌より抽出したRNAと比較してPurboxのところで転写がポーズしている転写産物をより多く含んでいることがわかった。このことは、制御が転写の伸長を阻害することによってなされていることを示唆する。後者については、2つのPurboxを部位化定変異導入法により破壊したpurR遺伝子を作製し、発現ベクターにクローニングすることに成功し、誘導によりpurR遺伝子産物が効率よく発現することを確認した。

This study aims to clarify the structure-function relationship between the regulatory factors of E. coli DNA binding protein PurR. This year, the PurR protein expression control mechanism was analyzed and the PurR protein expression rate and mass production system were established. The Purbox in the PurR gene is the most important part of the PurR gene. The Purbox in the PurR gene is the most important part of the PurR gene (The Purbox of the purR gene is located in the vicinity of the writing start point 95b and 183b in the case of purR gene), the purR gene is located in the middle of the stage of the beginning of writing, and the stage of the elongation of writing is located in the middle of the stage. A detailed analysis of the product was carried out. The result is that the virus is present in the culture, the RNA is present in the culture, the RNA is present in the culture, This is the first time I've ever seen a woman. The latter method is to determine the position of the Purbox, to control the purR gene, to detect the purR gene.