大腸菌プリンヌクレオチド生合成系制御蛋白質PurRの構造と機能

大肠杆菌嘌呤核苷酸生物合成调控蛋白PurR的结构与功能

• 批准号: 03259206
• 负责人: 三瓶 嚴一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03259206/
• 关键词: DNA結合蛋白質; プリンヌクレオチド生合成系; Pur Box

本研究は大腸菌プリンヌクレオチド生合成系の制御因子であるDNA結合蛋白質PurRの構造と機能の関係を明らかにすることを目的としている。PurR蛋白質の効率の良い大量発現系を作成するための前段階として、本年度もPurR蛋白質をコ-ドするpurR遺伝子の発現制御機構の解析を行った。昨年度は、種々のDNA断片を用いたゲル・シフト・アッセイおよび変異型Pur boxを用いたpurR遺伝子の発現の解析を行い、PurR蛋白質の2つのPur boxへの結合は、親和性の差はあるものの非協同的であることと、2つのPur boxは発現抑制効果の点ではほぼ同程度であり、効果的な抑制のためには両方とも必要であることが明らかとなった。また、変異型Pur boxとPurR蛋白質の結合の解析から、Pur boxのどの塩基がPurR蛋白質との相互作用に重要な役割を果たしているかについて示唆を得ることができた。本年度はこれをさらに進め、purR遺伝子の自己制御が転写の開始の段階に働いているのか、それとも転写の伸長の段階に働いているのかを明らかにするために、転写産物の詳細な解析を行った。その結果、過剰のアデニンが存在する培地中で培養した菌より抽出したRNAは、アデニンが存在しない培地で培養した菌より抽出したRNAと比較してPur boxのところで転写がポ-ズしている転写産物をより多く含んでいることがわかった。このことは、制御が転写の伸長を阻害することによってなされていることを示唆する。今後は、2つのPur boxを壊したpurRを大量発現系につないで効率よくPurR蛋白質を発現させ、精製を行ってゆきたい。

The purpose of this study is to determine the control factor, DNA binding protein, PurR synthesis, and the purpose of this study. The rate of PurR protein loss is good. A large number of systems have been made into the first stage of this year's PurR protein production, and this year's PurR protein production rate has improved the performance of the Royal Machinery Institute. Last year, all kinds of DNA fragments were used to analyze the results of purR fragments, PurR protein 2 Pur box fragments, PurR protein fragments, non-concordant Pur box fragments, anti-DNA fragments, DNA fragments, DNA fragments, The suppression of the fruit does not make sense if it is necessary. The results of the combination of Pur box PurR protein and Pur box protein were analyzed. The interaction between the two genes was very important. In the current year, the purR system is responsible for the opening of the system, the opening of the system, and the extension of the section. this year, the system is in progress, and the system is responsible for the beginning of the system. The results show that there is a positive correlation between the concentration of RNA extracted from the culture floor, the concentration of bacteria extracted from the culture floor, the concentration of bacteria extracted from the culture floor, the amount of RNA extracted from the culture floor, the concentration of Pur box, the content of the product, and the content of the product. If you want to do something about it, make sure that you don't have to do anything to stop the damage. In the future, a large number of Pur box proteins have been detected in the purR. The rate of PurR protein has been detected.

项目成果

Genichi Sampei: "Regulatory mechanism of gene expression of Escherichia coli pur R" Journal of Biological Chemistry.

Genichi Sampei：“大肠杆菌基因表达的调控机制”生物化学杂志。