大腸菌プリン生合成系制御蛋白質PurRの構造と機能

大肠杆菌嘌呤生物合成调节蛋白PurR的结构与功能

• 批准号: 02263205
• 负责人: 三瓶 嚴一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02263205/
• 关键词: DNA結合蛋白質; プリンヌクレオチド生合成系; オペレ-タ-配列

本研究は大腸菌プリンヌクレオチド生合成系の制御因子であるDNA結合蛋白質PurRの構造と機能の関係を明らかにすることを目的としている。PurR蛋白質の効率の良い大量発現系を作成するための前段階として、本年度はPurR蛋白質をコ-ドする<purR>___ー遺伝子の発現制御機構の解析を行った。PurR蛋白質は、プリンヌクレオチド生合成系遺伝子の発現を過剰のプリン存在下で、遺伝子の制御領域に存在するオペレ-タ-配列であるPur boxに結合することにより負に調節するが、同時に一部のピリミジンヌクレオチド生合成系遺伝子および<purR>___ー遺伝子自身の発現をも負に調節する。PurR蛋白質による制御を受ける他の遺伝子と異なり、<purR>___ー遺伝子領域には2つのPur boxが転写点の下流部分に存在するが、これらを介してどの様な機構で調節がなされているか、またこれら2つのPur boxの役割分担はどうなっているのかを明らかにするために、種々のDNA断片を用いたゲル・シフト・アッセイおよび変異型Pur boxを用いた<purR>___ー遺伝子の発現の解析を行った。その結果、PurR蛋白質の2つのPur boxへの結合は親和性の差はあるものの、非協同的であることがわかった。発現抑制効果の点では、2つのPur boxはほぼ同程度であり、効果的な抑制のためには両方とも必要であることがわかった。また、変異型Pur boxとPruR蛋白質の結合の解析から、Pur boxのどの塩基がPurR蛋白質との相互作用に重要な役割を果たしているかについて示唆を得ることができた。これは今後PurR蛋白質の構造と機能の関係を解析する上で有用な情報となる今後は、2つのPur boxを壊した<purR>___ーを大量発現系につないで効率よくPurR蛋白質を発現させ、精製を行ってゆきたい。

This study は coliform プ リ ン ヌ ク レ オ チ ド raw GeChengXi の suppression factor で あ る DNA binding protein PurR の tectonic と function の masato を and Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. PurR protein の い large 発 の good working rate is now を made す る た め の earlier order と し て, this year's は PurR protein を コ - ド す る < PurR > ___ ー heritage 伝 son の 発 system now royal institution の parsing line を っ た. PurR protein は, プ リ ン ヌ ク レ オ チ ド GeChengXi but 伝 son の 発 を now through turning の プ リ ン で, in the presence of legacy 伝 son の に suppression field exist す る オ ペ レ タ - match column で あ る Pur Box に combining す る こ と に よ り negative に adjust す る が, at the same time に a の ピ リ ミ ジ ン ヌ ク レ オ チ ド GeChengXi but 伝 son お よ び < purR > ___ ー heritage 伝 son own の 発 now を も negative に adjust す る. PurR protein に よ る suppression を by け る he の but 伝 と different な り, < PurR > ___ ー heritage 伝 sub-fields に は 2 つ の Pur box が planning write の dirty parts に exist す る が, こ れ ら を interface し て ど の others な institutions で adjust が な さ れ て い る か, ま た こ れ ら 2 つ の Pur Box cut の service sharing は ど う な っ て い る の か を Ming ら か に す る た め に, kind of 々 の DNA fragment を with い た ゲ ル · シ フ ト · ア ッ セ イ お よ び - different Pur box を with い た < purR > ___ ー heritage 伝 son の 発 line is の analytic を っ た. そ の results, 2 つ PurR protein の の Pur box へ の combining は affinity の poor は あ る も の の, synergy で あ る こ と が わ か っ た. 発 now inhibit unseen fruit の point で は, 2 つ の Pur box は ほ ぼ with degree で あ り, unseen fruit な inhibiting の た め に は struck party と も necessary で あ る こ と が わ か っ た. ま た, Pur - heteromorphosis box と PruR protein の combining の parsing か ら, Pur box の ど の salt base が PurR protein と の interaction に important な "を cut fruit た し て い る か に つ い て in stopping を must る こ と が で き た. こ れ は の PurR protein structure in the future と function の masato is を parsing す る で な useful information on と な る future は, 2 つ の Pur box を 壊 し た < PurR > ___ ー を large 発 now is に つ な い で sharper rate よ く PurR protein を 発 now さ せ, refined を っ て ゆ き た い.

项目成果

Kyoko Nakamura: "Regulatory mechanism of gene expression of <Escheridia>___ー <coli>___ー <purR>___ー" Journal of Biological Chemistry.

Kyoko Nakamura：“<埃希氏菌>_____ <大肠杆菌>____ <purR>____”基因表达的调节机制《生物化学杂志》。