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組換え中間体“Holliday構造"を切断するエンドヌクレアーゼRuvCの解析

切割重组中间体“霍利迪结构”的核酸内切酶 RuvC 的分析

基本信息

批准号：
04254209
负责人：
岩崎博史
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌ruvC遺伝子は、遺伝学的な解析から、相同的組換えの後期過程に関与することが示唆されていた。我々は、精製したタンパク質を用いて、RuvCタンパク質が相同的組換えの中間体と考えられているHolliday構造を特異的に切断するエンドヌクレアーゼであることを証明している。本研究期間においては、RuvCエンドヌクレアーゼの生化学的性質についてより詳しく解析し、以下のような知見を得た。1、合成オリゴヌレオチドを用いて作成した十字型DNAはHolliday構造のアナログである。RuvCのDNA結合能は、通常の2重鎖DNAよりも合成十字型DNAに対するアフィニティーの方がより高い。2、RuvCのDNA結合能は、Mg^<++>に有無に影響されないが、切断反応には必須である。3、RuvCは、Holliday構造の交差点を中心にして全く点対称な位置で切幡する。4、合成オリゴヌクレオチドで作製した十字型DNAのみならずY字型DNAもRuvは切断する。このとき、対称な位置にあるDNA同志に相同性が必要である。このことは、Holliday junction(Holliday構造の交差点)の位置の移動(branch migration)の可能な構造が、RuvCによる切断に必要なことを示唆している。また、RuvCタンパク質と同じように、組換え後期過程に関与すると考えられていたRuvA、RuvBタンパク質についてもin vitroの実験で、組換え中間体におけるHolliday Junctionのbranch migrationを促進するという証拠を得た。これらのことから、組換え素過程において、次のようなモデルを提唱した。DNAに2重鎖切断などが生じた場合、プロセッシングにより単鎖DNAが形成される。RecAタンパク質がこの単鎖DNAに結合し、無傷の2重鎖DNAとの相同性を検索し、ヘテロ2重鎖を形成する(Holliday構造の形成)。形成されたHolliday junctionにRuvAB複合体が作用し、brance migrationを促進して組換え領域を拡大する。適当なところまでbranch migrationが進んだときRuvCがHolliday構造を切断解消する。このとき生じたニックはDNAリガーゼでシールされて組換え体が生じる。今後このモデルをより確かのものとするために、RecA、RuvAB、RuvC3種のタンパク質の機能のスウィチングについて解明されなければならないと思われる。

Escherichia coli ruvC 缝子は, 缝学なanalyticsから, the same combination of late-stage process and the same combination of することがshows the instigation of されていた. I use the same combination as the refined したタンパクquality いて, and the RuvC タンパクquality が is the same as the えの intermediate とtestているHolliday structureをSpecific にcut するエンドヌクレアーゼであることをprove している. During this study, the biochemical properties of RuvC's biochemical properties were analyzed and analyzed, and the following information was obtained. 1. Synthesize the オリゴヌレオチドを using いて to create the した cross-shaped DNA and はHolliday structure のアナログである. RuvC's DNA binding ability is は, and the usual 2 double-locked DNA よりも synthesizes cruciform DNA に対するアフィニティーの方がより高い. 2. The DNA binding energy of RuvC and the presence or absence of Mg^<++> are not affected by the presence or absence of RuvC, and it is necessary to cut off the reaction. 3. The intersection point of RuvC and Holliday structure is the center and the point is the whole point and the position is the cut flag. 4. Synthesize the オリゴヌクレオチドでしたCross-shaped DNAのみならずY-shaped DNAもRuvはcutする.このとき、対sayな Position にあるDNA homosexuality にidentity がである.このことは, Holliday junction (Holliday structure のintersection point) の position の movement (branch migration) の structure が, RuvC による cutting に neccessary なことを Show 唆している.また, RuvC タンパク性と同じように, Group replacement えlater process にSeki and するとKao えられていたRuvA, RuvB タンパクquality についてもinの実験で in vitro, intermediate におけるHolliday Junction のbranch migration を promotion するという证拠をget た.これらのことから, group replacement element process において, times のようなモデルを提声した. In the case of DNA に2 double lock cutting, it is a などが生じた case, and a プロセッシングにより単単 lock DNA is formed される. RecA タンパク性がこの単DNAにcombinationし, 无码の2 re-locked DNA とのidentity を検SOし, ヘテロ2 re-lock を formation する (Holliday structure の formation). The formation of the Holliday junction is the role of the RuvAB complex, and the promotion of migration is the field of reorganization. Appropriate なところまでbranch migrationが入んだときRuvCがHolliday structureをcut off solutionする.このとき生じたニックはDNA リガーゼでシールされて change the body が生じる. From now on, RecA, RuvAB, RuvC3 Kind of のタンパク性のFUNCTION のスウィチングについて Explain されなければならないと思われる.