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β-ヘキソースアミニダーゼαサブユニット異常症の遺伝子解析とペプチド構造解析

β-己糖氨基酶α亚基紊乱的遗传分析和肽结构分析

基本信息

批准号：
04260223
负责人：
田中あけみ
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

[目的]前年度において、Tay-Sachs病の患者24例のβ-ヘキソースアミニダーゼ、αサブユニット遺伝子の解析を行い、患者の対立遺伝子の80%にも及ぶ変異を見つけた。これは、イントロン5の3′末端のGがTに置換されたものであった。今年度は、この変異遺伝子により作られるαサブユニット蛋白の性質を調べるとともに、乾燥瀘紙血を用いて日本人集団におけるこの変異遺伝子の頻度を調べた。さらに、他の遺伝子変異についても検索した。[方法](1)Northern blot法により、変異遺伝子から産生されるmRNAの大きさと量を調べた。(2)DEAE-セルロースカラムでヘキソースアミニダーゼのAとRを分け、変異酵素蛋白の性質を調べた。(3)COS細胞に変異c-DNAを導入して、発現実験を行った。(4)乾燥瀘紙血よりDNAを抽出し、allele specific oligonucleotide hybrdization法により変異遺伝子の有無を調べた。(5)その他の変異対立遺伝子については、PCRでαサブユニットのc-DNAを増幅し塩基配列を求めた。[結果](1)イントロン5の3′末端の一塩基置換によりエクソン6が完全に欠失するスプライシングの異常を来していた。mRNAは、正常の長さより短く、正常の量の約3/4であった。その他の異常なスプライシングは、起こっていなかった。(2)ヘキソースミニダーゼをDEAE-セルロースカラムでAとBとに分けた各々について、4-MU-GlcNAcと4-MU-GlcNAc-6SO_4とのそれぞれの基質で活性を測定したところ、変異αサブユニット蛋白は、βサブユニットと結合はできるが、酵素活性は持ち得ないと推測された。(3)遺伝子発現実験でも、変異酵素蛋白は、活性を示さなかった。(4)乾燥瀘紙血を用いたスクリーニングから、保因者頻度は1/137.6人、患者頻度は1/59.631人と計算された。(5)その他の変異対立遺伝子は10個で、うち1つは別のスプライジング変異、5つはmissese mutation4つはmRNAを産生しないものであった。

[Objective] In the past year, 24 patients with Tay-Sachs disease were analyzed for β-, α-, and β-, α-, β- The G at the end of the 3′ terminal is replaced by the G at the end of the 5 ′ terminal. This year, the frequency of this variant protein was adjusted by the Japanese government. And then, when he came, he said,"I'm not going to do this." [Methods](1)Northern blot method was used to detect the expression of mRNA and the amount of mRNA. (2) DEAE-C-R is the key to the development of the enzyme. (3)COS cells were transformed into different c-DNA and developed. (4)DNA extraction from dried blood, allele specific oligonucleotide hybridization method to determine the presence or absence of DNA (5)The sequence of DNA sequences in different DNA sequences was determined by PCR. [Results](1) A group substitution at the 3′ end of the protein 5 was found to be abnormal in the protein 6. mRNA is about 3/4 of normal length and short length. He is the only one who has the right to do so. (2)The enzyme activity was determined by the enzyme activity assay. The enzyme activity was determined by the enzyme activity assay. The enzyme activity was determined by the enzyme activity assay. (3)The expression of protein and activity of different enzymes is very important. (4)The frequency of patients with dry blood is 1/137.6, and the frequency of patients is 1/59.631. (5)There are 10 different genes, 1 different gene, 5 different missese mutation, 4 different mRNA.