P型イオン輸送性ATP分解酵素β鎖分子族の機能

P型离子传输ATP酶β链分子团的功能

• 批准号: 04266224
• 负责人: 川村 越
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04266224/
• 关键词: (Na,K)ATPアーゼ; (H,K)ATPアーゼ; βサブユニット; キメラ分子; ジスルフィド結合; 部位特異的変異導入; 卵母細胞

(Na,K)ATPアーゼ、(H,K)ATPアーゼはともに相同性の高い2種のサプユニット(α鎖、β鎖)から構築されているが、β鎖の機能につては不明な点が多い。そこでβ鎖の機能せ以下の観点から検討した。1.特異的変異導入による(-S-S-)結合の切断β鎖には保存性の非常に高い3本の(-S-S-)結合が存在する。量盛N-末端に近い(-S-S-)結合に変異を導入して切断しても安定なαβ複合体が形成されたが、他の2つの(-S-S-)結合の場合は変異β鎖はα鎖と会合できなかった。しかしこの安定な複会体も機能(ATP分解活性)を欠いていた。(H,K)ATPアーゼのβ鎖と(Na,K)ATPアーゼのα鎖とは安定な複合体せ形成するが機能的ではない。両β鎖間で最も相同性の低いのは最もN-末端側(-S-S-)結合ループ内のアミノ酸配列であり、これらの結果から判断して、このループが両ATPアーゼが機能的であるための特異的領域である可能性を指摘できた。そこでこの可能性を検証するために両β鎖間のキメラ体を構築した。2.(Na,K)ATPアーゼ、(H,K)ATPアーゼβ鎖間のキメラ体の構築両β鎖ともにほぼ3等分する位置に制限酵素部位を導入し、それらの部位で互いに入れ換えたえたキメラ体を構築した。現在これらキメラ体のα鎖安定化能や、生成したαβ複合体のATP分解活性やイオン輸送活性等を検討中である。さらにこれらキメラ体で興味あることは、両酵素の細胞膜内局在性【(H,K)ATPアーゼはapical側に、(Na,K)ATPアーゼはbasolaterel側に局在】の解明の手がかりとして有効なことである。我はβ鎖がこれらATPアーゼの細胞内輸送で中心的役割を果たしているとの成績せ得ており、これらキメラ体とα鎖との複合体の挙動を共焦点顕微鏡で追跡することによりこの門題に接近できると考えている。

(Na, K) ATP ア ー ゼ, (H, K) ATP ア ー ゼ は と も に identity の high い two の サ プ ユ ニ ッ ト (alpha, beta, lock lock) か ら build さ れ て い る が, beta function of lock の に つ て は が い more unknown な point. Youdaoplaceholder0 た でβ locks the <s:1> function せ the following 観 観 points た ら検 discuss た. 1. Specific variations of different import に よ る (- S - S -) combined with の cut beta lock に は save sex の に 3 い の very high (- S - S -) combined with が す る. Quantity sheng N - terminal に nearly い (- S - S -) combined with に - different を import し て cut し て も settle な alpha beta complex が form さ れ た が, 2 つ he の の (- S - S -) combined with は の occasions - meet different は alpha beta lock lock と で き な か っ た. The function of the な compound (ATP catabolic activity)を is deficient in <s:1> て た た. (H, K) ATP ア ー ゼ の beta と lock (Na, K) ATP ア ー ゼ の alpha lock と は settle な complex せ form す る が functionary で は な い. Struck between beta lock で も phase most gay の low い の は most も N - terminal (- S - S -) combined with ル ー プ within の ア ミ ノ acid with column で あ り, こ れ ら の results か ら judgment し て, こ の ル ー プ が struck ATP ア ー ゼ が functionary で あ る た め の specific areas で あ る possibility を blame で き た. Youdaoplaceholder0 そ で で <e:1> <s:1> possibility を検 evidence するために two β -interlocking <s:1> キメラ bodies を construct た. 2. (Na, K) ATP ア ー ゼ, (H, K) ATP ア ー ゼ between beta lock の キ メ の ラ body building struck beta lock と も に ほ ぼ 3 equal す る location limitations に enzyme parts を import し, そ れ ら の parts で mutual い に change into れ え た え た キ メ を ラ body building し た. Now こ れ ら キ メ ラ の alpha lock body stabilization や, can generate し た alpha beta complex の ATP decomposition activity や イ オ ン conveying active を 検 beg in で あ る. さ ら に こ れ ら キ メ ラ body で tumblers あ る こ と は struck and enzyme の bureau within the cell membrane in the sexual 【 (H, K) ATP ア ー ゼ は apical side に, (Na, K) ATP ア ー ゼ は basolaterel side に bureau in 】 の interpret の hand が か り と し て have sharper な こ と で あ る. I は beta lock が こ れ ら ATP ア ー ゼ の intracellular delivery で center "を cut fruit た し て い る と の grades せ must て お り, こ れ ら キ メ ラ と alpha lock body と の complex の 挙 dynamic を total focus 顕 micromirror で tracing す る こ と に よ り こ の topic に door close で き る と exam え て い る.

项目成果

Yoshinobu Mutoh: "Reduction and inactivation of the sarcoplasmic CA^<2+>-ATPase by 2-mercaproethanol -Contrast to the (Na^+,K^+)ATPase-" J. UOEH. 14. 253-260 (1992)

Yoshinobu Mutoh：“通过2-巯基乙醇减少和灭活肌浆CA 2 -ATP酶-与(Na 2 ，K 2 )ATP酶对比-”J. UOEH。

Yoshinobu Mutoh: "Expression and assembly of Torpedo californica (Na,K)ATPase α-subunit truncated at N-terminal end in Xenopus oocytes" Biochemistry International. 26. 775-785 (1992)

Yoshinobu Mutoh：“爪蟾卵母细胞中 N 末端截短的加州鱼雷 (Na,K)ATP 酶 α 亚基的表达和组装”《生物化学国际》26. 775-785 (1992)。

Shunsuk Noguchi: "Assembly of hybrid from the α-subunit of Na^+/K^+-ATPase and β-subunit of H^+/K^+-ATPase" Biochem. Biophys. Res. Commun.182. 656-666 (1992)

Shunsuk Noguchi：“Na^+/K^+-ATP 酶的 α 亚基和 H^+/K^+-ATP 酶的 β 亚基的组合”Biochem。182。 (1992)