P型イオン輸送性ATP分解酵素beta鎖分子族の機能

P型离子传输ATP酶β链分子群的功能

• 批准号: 05259226
• 负责人: 川村 越
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05259226/
• 关键词: (Na^+,K^+)ATPase; (H^+,K^+)ATPase; beta-サブユニット; キメラ分子; ジスルフィド結合; 卵母細胞; 遺伝子操作

シビレエイ(Na,K)ATPasebeta鎖とブタ胃壁細胞(H,K)ATPasebeta鎖間で、2郡のキメラ体cDNAを構築し、それらをアフリカツメガエル卵母細胞中で発現させキメラbeta-鎖の特性を調べた。第I郡のキメラ体は、beta鎖のN末端側に1本存在する膜貫通領域に新たに導入したSnaBIサイトで互いに入れ換えたキメラ体(NsH,HsN)である。両キメラbeta鎖共、(Na,K)ATPasealpha鎖と安定な会合体を形成し、形成した会合体には、ATP分解活性が、野生型beta鎖との会合体と同程度存在した。このことは、beta鎖の細胞質側に存在するN末端側から膜貫通領域に至る部分は、(Na,K)ATPaseと(H,K)ATPaseで交換可能であり、両beta鎖いずれの特異領域ではないことを意味している。第II郡のキメラ体は、beta鎖の細胞外領域に存在する(-S-S-)結合により生じるループを互いに変換したキメラ体である。ループは3個存在するが、今回はシビレエイ(NaK)ATPasebeta鎖の最もN末端寄りのループ(ループ-1)を(N,K)ATPasebeta鎖のループ-1で置換したキメラ体は〔T_<beta>(L_1P_<HKbeta>)〕を構築した。対照としてラット(Na,K)ATPasebeta鎖のループ-1で置換したキメラ体〔T_<beta>(L_1R_<beta1>)〕を用いた。両キメラ体とも卵母細胞中で(Na,K)ATPasebeta鎖と安定な会合体を形成したが、T_<beta>(L_1P_<HKbeta>)とalpha-鎖との会合体にはATP分解活性が検出できなかった。ループ-1領域は両beta鎖間で相同性も低く、両beta鎖の特異的領域の1つであると推定した。

Na,K (Na,K), cDNA (K), cDNA (K), cDNA, and oocytes were detected in the oocytes. In the first county, there are some new devices in the field of membrane communication, such as the body of the SnaBI, the body of the beta, the body of the body, the body of the body (NsH,HsN). The confluence of (Na,K) ATPasealpha-diazepam, (Na,K)-ATPasealpha-diazepam, conjunctiva, ATP-decomposing activity and wild-type beta conjunctivium existed in the same degree. It is possible that there is a link between the N-terminal membrane and the partial, (Na,K) ATPase (HmemK) ATPase, and that the beta may be affected by the presence of a specific domain. In the second county, there is an extraneous body in the extracellular domain (- Smurf S -) in the second county, and the beta family is in the extracellular field. This time, you can send the most expensive (NaK) ATPasebeta to the third ATPasebeta (NMJ K). Please do not send any information to the client. According to the standard (Na,K) ATPasebeta setting (LTX), please use the word (LTH) (LTX). The confluence of Na,K, ATPasebeta, and diazepam in the oocyte formed the chimera, and the ATP decomposition activity was detected by the syncytial ATP decomposition activity. There is a presumption that the domain of the beta is similar to that of the beta, and that the domain is similar to each other.

项目成果

Larisa A.Vasilets: "Voltage-dependent inhibition of the sodium pump by external sodium:Species differences and possible role of the N-terminus of the alpha-subunit" Eur.Biophys.J.21. 433-443 (1993)

Larisa A.Vasilets：“外部钠对钠泵的电压依赖性抑制：物种差异和 α 亚基 N 末端的可能作用”Eur.Biophys.J.21。

M.Kawamura: "Site-directed Mutagenesis in Na^+/K^+-ATPase" Biol.Chem.Hoppe-Seyler. 374. 546 (1993)

M.Kawamura：“Na^/K^-ATP酶中的定点诱变”Biol.Chem.Hoppe-Seyler。

H.Kawano: "Phenytoin,an antiepileptic drug,competitively blocked non-NMDA receptors produced by Xenopus oocyte" Neuroscience Letters. 166. 183-186 (1994)

H.Kawano：“苯妥英，一种抗癫痫药物，竞争性阻断非洲爪蟾卵母细胞产生的非 NMDA 受体”《神经科学快报》。

S.Ueno: "Construction and Expression of Chimeric cDNAs of Na^+/K^+-and H^+/K^+-ATPase beta-subunit" Biol.Chem.Hoppe-Seyler. 374. 567-568 (1993)

S.Ueno：“Na^/K^-和 H^/K^-ATPase β 亚基嵌合 cDNA 的构建和表达”Biol.Chem.Hoppe-Seyler。

S.Noguchi: "The functional roles of disulfidebonds in the beta-subunit of (Na,K)ATPase as studied by site-directed mutagenesis" FEBS Letters. (in press).

S.Noguchi：“通过定点诱变研究 (Na,K)ATP 酶 β 亚基中二硫键的功能作用”FEBS Letters。