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変異mRNAの発現による(Na,K)ATPaseの構造と機能の解析

通过表达突变体 mRNA 分析 (Na,K)ATPase 的结构和功能

基本信息

批准号：
63617514
负责人：
川村越
金额：
$ 1.54万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63617514/
关键词：
(Na,K)ATPase 変異導入 β鎖機能発現アフリカツメガエル

项目摘要

(Na,K)ATPaseのβ鎖の機能をXenopus oocyteの発現系を通して以下の点で解析した。1.糖鎖付加阻害剤ツニカマイシン存在下でoocyteを培養することにより、β鎖にのみ結合している糖鎖を欠く(Na,K)ATPaseを調整しその特性を分析した。ATP分解活性、ウワバイン結合活性、Rb^+輸送活性のすべてにおいて糖鎖の欠損は全く影響せず、機能に糖鎖は直接影響を与えないことを明らかにした。2.mRNAα、mRNAβを時期をずらしてoocyteへ注射し発現産物の性質を分析した。両mRNAが同時にoocyte中に存在するときは活性な(Na,K)ATPaseが形成されたが、例えばmRNAβを先に注射し十分量のβ鎖が発現しているoocyteに新たにmRNAを注射して発現させても活性な酵素は形成されなかった。すなわち活性なα、β複合体の形成は両蛋白質の翻訳時、あるいは翻訳直後でのみ生じることが示唆された。3.β鎖のC末端側欠損変異体を作製しその機能を調べた。C末端側約半分を欠く変異β鎖は活性なATPaseを形成することができず、これはおそらくα鎖との会合性を欠ことに起因することが示された。したがってα鎖との会合には少なくともβ鎖のC末端側が関与していることが示唆された。これらの結果はβ鎖は(Na,K)ATPaseの機能発現に必須であることを示しているが、機能を具体化していない。そこでさらにβ鎖の非常に保存的な3-non coding領域や、やはり保存性の高いシステイン残基へ変異導入し、β鎖の機能を探す手掛かりとしたい。

(Na The function of β-lock of K)ATPase is explained in the following points. 1. Analysis of the characteristics of the enzyme in the presence of a carbohydrate inhibitor ATP decomposition activity, Rb^+ binding activity and Rb^+ transport activity are all affected by the deficiency of carbohydrate and directly affected by carbohydrate function. 2. mRNA α and mRNAβ were detected by PCR. When mRNA is simultaneously present in oocyte, the activity of (Na,K)ATPase is formed. For example, mRNA beta is injected first, and a very high amount of beta lock is produced. The formation of α-and β-complexes is a process of protein inversion and protein production. 3.β-lock C terminal side loss is different from the control function. The C-terminal is about half way down and the β-terminal is about half way down. The alpha lock and the beta lock meet on the C-terminal side. As a result, the function of β-linked (Na,K)ATPase must be demonstrated and embodied. The 3-non coding domain of the β-lock is very important, and the function of the β-lock is very important.