ヘモグロビンの構造変化のX線結晶解析

血红蛋白结构变化的 X 射线晶体分析

• 批准号: 05244209
• 负责人: 森本 英樹
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05244209/
• 关键词: 時分割ラウエ法; ヘモグロビン; 単結晶; 一酸化炭素光解離; 一酸化炭素再結合; 光解離性架橋; 組換DNA法

今年度の研究は次の四点である。1.時分割ラウエ法の最初の試料として、光でCOが解離し、COが解離してもあまり大きな構造変化を起こさず、COの解離で結晶がこわれず、COは比較的ゆっくり再結合するヘモグロビン(Hb)の候補であるα_2^<87His→Phe>(Fe-CO)β_2(Ni)を組換DNA法と化学修飾で作った。しかし、α^<87His→Phe>の大腸菌での発現効率が低く、最初の試料には適さないことがわかった。急遽α_2(Mg)β_2^<67Val→Ile>(Fe-CO)にのりかえ、これを作り、現在結晶化している。結晶が得られれば、3月のマシンタイムに、変異を導入していない試料とともに、測定にかける予定である。2.光解離性の架橋試薬BNBAを使って,HbをO_2非結合型(deoxyHb)の構造に固定することを試みた。cagedTstateを作る試みである。BNBAをdeoxyHbと反応させ、その中から2量体に割れなくなった部分を取出し、酸素平衡曲線を測定したところ、O_2が結合しにくくなった成分があった。β93のSH基と、近くのα鎖のLysとの架橋がねらいだったが、β93SHが使われずにβ鎖どうしに架かった可能性が高く、その場合は光解離性が失われているかもしれない。この架橋Hbの性質を明らかにする仕事を急いでいる。3.deoxyHbの硫安で作った結晶中で、分子間でイオン結合を作っているα鎖のGluとβ鎖のLysの片方を、電荷のないアミノ酸に置換した2種類のHbを組換DNA法で作った。まだ結晶化を試みていない。4.タンパク分子の結晶中での性質を直接調べる手段として、顕微分光光度計のもとで、単結晶のまわりのO_2濃度を変化させながら、光吸収スペクトルをとることで、酸素平衡曲線を測定できるようにした。

This year, <s:1> research である times <s:1> four points である. 1. When the segmentation ラ ウ エ method の の initial sample と し て, light で CO し が dissociation, CO が dissociation し て も あ ま り big き な structure - the を up こ さ ず で crystallization, CO の dissociation が こ わ れ ず, CO は comparison of ゆ っ く り combining す る ヘ モ グ ロ ビ ン (Hb) の alternate で あ る alpha _2 ^ < 87 ihs - Phe > (Fe, CO) beta _2(Ni)を substitution DNA method と chemical modification で to った. し か し, alpha ^ < 87 ihs - Phe > の coliform で の が low く 発 now working rate, initial の sample に は optimum さ な い こ と が わ か っ た. Sharp alpha _2 (Mg) beta _2 ^ < 67 val, Ile > (Fe - CO) に の り か え, こ れ を り, now crystallization し て い る. Crystallization が have ら れ れ ば, march の マ シ ン タ イ ム に, - different を import し て い な い sample と と も に, determining に か け る designated で あ る. 2. Photolysis from sexual の bridging try 薬 BNBA を make っ て, Hb を O_2 non combination (deoxyHb) の tectonic に fixed す る こ と を try み た. cagedTstateを try る. BNBA を deoxyHb と anti 応 さ せ, そ の in か ら 2 quantity body に cut れ な く な っ た part out を し, determination of acid element balance curve を し た と こ ろ, O_2 が combining し に く く な っ た composition が あ っ た. Beta の SH と, nearly 93 く の alpha lock の Lys と の bridging が ね ら い だ っ た が, beta 93 SH が make わ れ ず に beta lock ど う し に frame か っ た high possibility が く, そ の occasions は photolysis from sexual が lost わ れ て い る か も し れ な い. The nature of the <s:1> bridge building Hb <s:1> is を Ming ら にする にする affairs を urgent で で る る る. 3. DeoxyHb の Ann で as っ た crystallization で, intermolecular で イ オ ン combining を as っ て い る alpha lock の Glu と beta lock の Lys の party を, charge の な い ア ミ ノ acid に replacement し た 2 kinds の Hb を で group in DNA method for っ た. Youdaoplaceholder0 crystallization を try みて な な な. 4. タ ン パ ク molecular の crystallization で の nature を direct べ る means と し て, 顕 differential light photometer の も と で, 単 crystallization の ま わ り の を O_2 concentration variations change さ せ な が ら, light absorption 収 ス ペ ク ト ル を と る こ と で, determination of acid element balance curve を で き る よ う に し た.