ヘモグロビンのサブユニットに4量体形成以前から用意されている構造変化の機構

四聚体形成前血红蛋白亚基结构变化的机制

• 批准号: 10157214
• 负责人: 森本 英樹
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10157214/
• 关键词: ヘモグロビン; X線結晶解析; 脊椎動物; 無脊椎動物; 分岐点; cDNA; 軟骨魚類; 分子進化

1) 引き続き、脊椎動物の系統樹の分岐点のまわりで、Hb(ヘモグロビン)の立体構造と機能の変化を見るために使うHbとして、硬骨魚類のクロマグロ、軟骨魚類のアカエイとシロザメ、脊椎動物と無脊椎動物の中間的存在である円口類の日本産のカワヤツメウナギ、Hbを持つ無脊椎動物で脊椎動物に最も近い棘皮動物のシロナマコからHbを取り、常時使用できる状態を維持した。一部他の研究室へも提供した。2) アカエイHbのCO結合型と配位子非結合型の結晶のX線結晶解析の精密化を完了した。ヒトのHbと立体構造を比較すると、構造上硬骨魚類Hbより更に離れていることがわかった。結果を「タンパク質立体構造の構築原理」ワークショップのポスターで発表し、論文を投稿中。3) アカエイHbに続いて、シロザメHb、クロマグロHb、ヤツメウナギHb、クロマグロβ鎖の4量体のCO結合型と配位子非結合型型のX線結晶解析は、すべて構造が解けており、それぞれデータの質を更に改善し、構造を精密化する段階に入っている。4) クロマグロHbをα鎖とβ鎖に分離する方法を確立した。また、構成するすべてのグロビン(α鎖4本とβ鎖1本)のcDNAの塩基配列を決定した。単離β鎖の酸素平衡曲線にボーア効果を確認した。5) ヤツメウナギHbのcDNAを発現させたが、活性あるタンパクにfoldingできていない。6) シロナマコHbの3種のグロビンのcDNAの塩基配列をほぼ完全に決定し、その一本を発現系に組み込み、発現foldingすることができた。

1)Introduction, divergence point of vertebrate phylogenetic tree, three-dimensional structure and functional transformation of Hb(Hb), teleost, cartilaginous fish, existence of vertebrate and invertebrate intermediate, Japanese origin, Hb is maintained in invertebrate, vertebrate and echinoderm. A part of his research room was provided. 2)The precision of X-ray crystallographic analysis of Hb CO-bound and ligand unbound crystals has been completed. Compared with the structure of Hb, the structure of Hb in teleost fish is different. The result is that the paper is submitted to the author of "The Construction Principle of Solid Structure". 3)X-ray crystallographic analysis, structural analysis, quality improvement, and structural refinement of the CO-binding and ligand unbound forms of the four quantities of Hb, Hb. 4)The method of separation of Hb α and β was established To determine the nucleotide sequence of the cDNA that constitutes the sequence (α-lock 4-lock 1-lock) The β-lock acid equilibrium curve is confirmed. 5)The cDNA of Hb is generated and folded. 6)The nucleotide sequence of the cDNA of the three kinds of Hb is completely determined, and the sequence of the cDNA of the three kinds of Hb is completely determined.

项目成果

雲財悟: "Rate constants for O_2 and CO binding to the α and β subunits within the R and T states of human hemoglobin." Journal of Biological Chemistry. 273. 23150-23159 (1998)

Satoru Kumozai：“O_2 和 CO 与人类血红蛋白 R 和 T 状态下的 α 和 β 亚基结合的速率常数。生物化学杂志 273。23150-23159 (1998)

柴山修哉: "Asymmetric cyanomet valency hybrid hemoglobin, (α^<+CN> β^<+CN>) (αβ) : The issue of valency exchange" Biochemistry. 37. 6221-6228 (1998)

Shuya Shibayama：“不对称氰基价杂化血红蛋白，(α^<+CN> β^<+CN>) (αβ)：价交换问题”生物化学 37. 6221-6228 (1998)。