大腸菌RecA蛋白質によるヌクレオフィラメント形成機構の解析

大肠杆菌RecA蛋白核丝形成机制分析

• 批准号: 05255206
• 负责人: 堀井 俊宏
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05255206/
• 关键词: 相同的組換え; 大腸菌; RecA蛋白質; DNA結合部位; 部位特異的変異導入

RecA蛋白質が行なうDNA鎖交換反応は、RecA蛋白質がATP存在下で単鎖DNAに結合してできるヌクレオフィラメントを介して行なわれ、このフィラメントの構造は、DNA鎖交換反応において重要な役割をする。このフィラメント上に存在する、siteI,siteIIと呼ばれる二つのDNA結合部位についてこれまで解析を行なってきた。平成5年度においては以下の実験を行なった。まず、クロスリンクの条件の検討を行なった。SiteIにのみDNAが結合しているヌクレオフィラメント(DNA-RecA-ATPγS複合体)に紫外線を照射した結果、Tyr103に加えて、アミノ酸残基178-183番目の領域内にもクロスリンクが架かった。この領域は、RecA蛋白質の立体構造に於てDNA binding wingと比較的近い位置にあるため、DNA binding wingに結合したDNAが、近接するこの領域にクロスリンクしたと考えられる。次に、Tyr103がDNAとの相互作用に関与しているかを調べた。Tyr103がトリプトファンに変化した変異型RecA蛋白質(RecA-Y103W)を部位特異的変異導入により作成した。トリプトファン残基の蛍光は回りの環境によって変化するため、DNAと相互作用していれば、その蛍光の変化が期待される。RecA-Y103W蛋白質のトリプトファンの蛍光を測定した結果、Tyr103に対応する残基(Trp103)の蛍光がDNAの結合により大きく変化し、RecA-Y103W蛋白質のTrp103はDNAと相互作用していることが明らかになった。その蛍光の変化の仕方から、DNAの塩基と塩基の間への挿入という非常に強い相互作用ではなく、比較的弱い相互作用であることが分かった。また、RecA-Y103W蛋白質の細胞内、試験管内に於ける活性を野生型RecA蛋白質と比較したところ、ほとんど変わらないことが示された。従って、野生型RecA蛋白質に於いて、Tyr103はDNAと相互作用している事が分かった。上記の研究成果はJournal of Biological Chemistryへの発表にむけて、2編の論文として、現在投稿準備中である。

RecA protein, DNA, ATP, ATP, DNA, DNA, ATP, ATP, DNA, DNA, ATP, ATP, and so on. Please tell me that there is a link between the two parts of the DNA joint, and that there is a link between the two parts of the DNA. In the year of Pingcheng, we will pay attention to the following financial statements. Please tell me that the conditions do not exist. The combination of SiteI DNA and DNA-RecA-ATP γ S complex showed the results of UV irradiation, the addition of Tyr103 and the presence of acid residues in the field. In the field, RecA protein is stereoscopically created in the vicinity of the DNA binding wing comparison, DNA binding wing is combined with DNA, and the field is close to each other. Secondary, Tyr103DNA interaction, interaction, and molecular interaction. The specific parts of the Tyr103 protein type RecA protein (RecA-Y103W) were transformed into the enzyme to make the product. The environment is sensitive to environmental degradation, DNA interaction is sensitive, and photosensitization is expected. The results of the determination of RecA-Y103W protein, Trp103, Trp103, DNA, RecA-Y103W protein, Trp103, DNA, RecA-Y103W protein, DNA, protein, DNA, protein, protein, DNA, DNA, protein, DNA, DNA, protein, DNA, protein, DNA, DNA, protein, DNA, protein, DNA In this paper, the results show that the interaction is very strong, and the weak interaction is much weaker than that of the weak interaction. in this paper, the results show that the interaction is very strong, the interaction is very strong, and the interaction is weaker than the weak interaction. The activity of wild type RecA protein was detected in the cells and tubes of RecA-Y103W protein, and the wild type protein was detected in the cell. The interaction between wild-type RecA protein and wild-type DNA protein is related to the interaction of wild-type protein and wild-type protein. In the previous Journal of Biological Chemistry, the research results are listed in the table, and the papers are published in 2%. They are now being prepared for submission.

项目成果

Eriksson,S.,Norden,B.,Morimatsu,K.,Horii,T.,Takahashi,M.: "Role of tyrosine residue 264 of RecA for the binding of cofactor and DNA." J.Biol.Chem.268. 1811-1816 (1993)

Eriksson,S.、Norden,B.、Morimatsu,K.、Horii,T.、Takahashi,M.：“RecA 酪氨酸残基 264 对辅因子和 DNA 结合的作用。”