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熱帯熱マラリア原虫におけるプロスタグランジン産生機構の解析

恶性疟原虫前列腺素产生机制分析

基本信息

批准号：
02F02271
负责人：
堀井俊宏
金额：
$ 0.26万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

世界的に待望されている新しい抗マラリア薬の開発の一環として、寄生性原虫に特異的な代謝経路の解析を行なった。感染性寄生原虫のプロスタグランジン産生系を分子生物学的に同定するためと、研究対象を熱帯熱マラリアから大量の試料の供給が可能なTrypanosoma属の原虫に変更して研究を行った。そして、T.bruceiプロスタグランジンF_<2_>合成酵素の遺伝子が染色体当たり1コピーしか存在しないことを確認し、その遺伝子を含む8kbの染色体DNAのBamHl断片を単離した。さらに、ネオマイシンおよびブラスチシジン耐性遺伝子を用いた相同的遺伝子組換え法を用いて、本酵素の遺伝子ノックアウト原虫を作製した。その結果、ノックアウト原虫は、本酵素の触媒するp-nitrobenzaldehyde還元活性の80%と9,10-phenanthrenequinone還元活性の50%を失ったが、プロスタグランジンF_<2_>合成酵素活性は25%しか低下しなかった。従って、T.bmceiは、本酵素以外にもプロスタグランジンF_<2_>合成酵素を持つことが明らかになった。ひきつづき、T.bruceiプロスタグランジンF_<2_>合成酵素のX線結晶構造解析を進め、結晶化条件の改善により、2.1Å分解能の三次元構造座標を決定した。また、T.cruziに対する殺虫作用を持つ薬草成分として発見されたコマロビキノンがT.cruziプロスタグランジンF_<2_->合成酵素により1電子還元を受けて、セミキノンラジカルに変換され、さちにスーパーオキシドアニオンラジカルを生成して殺虫効果を誘発することを証明した。

The world's most awaited new anti-malarial disease, the first link of the anti-malarial disease, and the analysis of the metabolic pathways specific to parasitic protozoa. Infectious parasitic protozoa のプロスタグランジンを molecular biology に同定するためと, research object を热帯热It is possible to supply a large amount of test materials and conduct research on protozoa of the genus Trypanosoma.そして、T.bruceiプロスタグランジンF_<2_>Synthetic enzyme の缝子がchromosome when たり1コピーしかExistenceしないことをconfirmationし、その缝子をcontainsむ8kbのchromosomal DNAのBamHl fragmentを単leaveした.さらに、ネオマイシンおよびブラスチシジンpatience remains the same as いたThe method of replacing the remaining enzymes is using the original enzyme, and the original enzyme is used to make the enzyme.そのRESULT, ノックアウト protozoa, this enzyme's catalyst, 80% of p-nitrobenzaldehyde reduction activity, 9,10-phenan Threnequinone reduction activity is reduced by 50%, and the synthetic enzyme activity is reduced by 25%.従って, T.bmceiは, this enzyme is other than this enzyme.ひきつづき、T.bruceiプロスタグランジンF_<2_> Synthetic enzyme X-ray crystal structure analysisを advanceめ、Improvement of crystallization conditionsにより、2.1Å decomposition energy and three-dimensional structural coordinates determinationした. The insecticidal effect of T.cruziマロビキノンがT.cruziプロスタグランジンF_<2_->Synthetic enzymeにより1 electron reduction をReceived けて, セミキノンラジカルに変change され, さちにスーパーオキシドアニオンラジカルを generates して insecticidal effect を lures 発することを proves した.