形質転換植物を用いた光合成組織における窒素酸化物代謝応答の分子機構の解析

利用转化植物分析光合组织中一氧化氮代谢反应的分子机制

• 批准号: 05266213
• 负责人: 森川 弘道
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05266213/
• 关键词: 亜硝酸還元酵素(NiR)cDNA; トランスジェニックシロイヌナズナ植物; パーティクルガン; NO_2代謝; 硝酸同化; NO_2同化能力; 硝酸還元酵素(NR); NO_2-Philic Plant

1.ホウレンソウNiR cDNAを有する形質転換シロイヌナズナ植物の作成とそのNO_2同化能力の測定:ビアラフォス耐性遺伝子を選抜マーカーに、ホウレンソウNiR cDNAを持つプラスミド(いずれもCaMV35S promoter、NOS terminatorを持つ)を遺伝子導入して、ビアラフォス耐性株11系統を得た。うち3系統の再分化当代でのサザン分析の結果、導入したNiR遺伝子が認められた。しかし、これらの自殖後代を用いたサザン分析では、NiR遺伝子は確認されなかった。また、選抜マーカーをハイグロマイシン耐性遺伝子とした上記と同様のプラスミドを導入して、ハイグロマイシン耐性株2系統を得た。うち1系統のR_2世代でサザン分析の結果、NiR遺伝子の導入が確認された。現在、この系統の株を増やし、NO_2暴露によるNO_2同化能力の測定を実施中である。2.シロイヌナズナNiR cDNAのクローニング:前年度シロイヌナズナNiR遺伝子全長を含むと考えられる4.4kbのゲノムDNA配列を得た。ホウレンソウNiR遺伝子と相同性(73%)を持つことによりこの配列の翻訳開始点上流と考えられる点から第4エクソン途中までが増幅されるプライマーを設計し、RT-PCR法によりcDNAを得た。塩基配列を決定した結果、ゲノミックNiR遺伝子の解析から予想される3つのイントロンと4つのエクソンを持つ構造がこのcDNAより確認された。今後、完全長のcDNAを得て、CaMV35Sプロモーターの制御下においたプラスミドを構築し、パーティクルガン法によるシロイヌナズナ形質転換個体の育成を行う予定である。3.シロイヌナズナのNO_2暴露に対する遺伝子発現応答の解析:シロイヌナズナNR,NiR遺伝子をプローブとしてノザン解析を行った結果、両遺伝子ともNO_2暴露後15分〜30分で転写量の増加が認められた。その後、急激に転写量は低下し、以後、調べた24時間目まで低い値であった。NO_2暴露においても硝酸誘導と同様、NR,NiR遺伝子の発現誘導が起こることからNO_2が少なくとも一部は硝酸として取り込まれていることが確認された。

1. The ability to assimilate no _ 2 was determined when the plant was tested for its ability to assimilate no _ 2. The ability of NiR cDNA to assimilate no _ 2 was determined. The ability to assimilate the plant was determined. The tolerance test of the plant was selected. The NiR cDNA was used to maintain the tolerance of the virus (CaMV35S promoter, NOS terminator), and the tolerance strain 11 system was tested. The third system redivides the results of the contemporary NiR analysis, and imports the results into the current data analysis system. The progeny of self-progeny was confirmed by the analysis and NiR analysis of self-progeny. Please select the system that registered the tolerance test, and the tolerance plant 2 system was successfully registered. The results of statistical analysis of the R _ 2 generation in the first system and the entry of the NiR child into the system confirmed the results of the analysis. At present, the ability of no _ 2 assimilation in the plants exposed to NO_2 has been determined. two。 In the previous year, the overall length of the NiR in the previous year included the allocation of the DNA in the previous year. The overall length of the NiR contains the DNA of the previous year. There is no significant difference between the two groups in terms of similarity (73%). The starting point is the starting point, the upstream test point is at the starting point, and the fourth day is on the way to the end of the way. in the middle of the day, there is no change in the design of the device, and the RT-PCR method shows that the cDNA is successful. The basic configuration column determines the results, and you want to make sure that you do not want to NiR the results. You want to make sure that you want to make sure that you do not want to do so. From now on, the full length of the cDNA, the CaMV35S system, the system and the system. 3. The results were analyzed after 15-30 minutes of NO_2 exposure and 15-30 minutes after exposure to NO_2. After the rush, the amount of writing is very low, and then, at 24 hours, the volume is low. When NO_2 is exposed to nitric acid, the same is true for nitric acid, and the NR,NiR is used to make sure that there is no _ 2 in nitric acid.

项目成果

Nishihara,M.: "Expression of the β-glucuronidase gene in pollen of lily (Lilium longiflorum),tobacco (Nicotiana tabacum),Nicotiana rustica and peony (Paecnia lactiflora) by particle bombardment." Plant Physiol.102. 357-361 (1993)

Nishihara, M.：“通过粒子轰击在百合（Lilium longiflorum）、烟草（Nicotiana tabacum）、Nicotiana rustica 和牡丹（Paecnialactiflora）花粉中表达 β-葡萄糖醛酸酶基因。102。” 1993）

Kodama,H.: "Transgenic roots produced by introducing Ri-vol genes into cucumber cotyledons by particle bombardment." Transgenic Research. 2. 147-152 (1993)

Kodama,H.：“通过粒子轰击将 Ri-vol 基因引入黄瓜子叶中产生转基因根。”

Morikawa,H.: "Transgenic “air-pollutant-philic plants" produced by particle bombardment." Proceedings of a JSPS-NUS Seminar,Physiological and Molecular Aspects of Plant Growth and Differentiation,Tsukuba,Japan.152-158 (1993)

Morikawa, H.：“通过粒子轰击产生的转基因“嗜空气污染物植物”。”JSPS-NUS 研讨会论文集，植物生长和分化的生理和分子方面，日本筑波。152-158 (1993)

Zheng,J.: "Fluorescent banding pattern analysis of eight taxa of Phaseolus and Vigna in relation to their phylogenetic relationships." Theor.Appl.Genet.87. 38-43 (1993)

郑J.：“菜豆和绿豆八个类群的荧光带型分析及其系统发育关系。”

Jin,Y.: "Transient expression of the β-glucuronidase gene in shoot primordia of Haplopappus gracilis by use of a pneumatic particle gun:" Plant Tissue Culture Lett.10. 271-274 (1993)

Jin, Y.：“使用气动粒子枪在 Haplopappus gracilis 的芽原基中瞬时表达 β-葡萄糖醛酸酶基因：”Plant Tissue Culture Lett.10 (1993)。