高等植物細胞における分子シャペロンの構造と役割

高等植物细胞中分子伴侣的结构和作用

• 批准号: 05268241
• 负责人: 西村 幹夫
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268241/
• 关键词: 分子シャペロン; シャペロン60; 熱ショックタンパク質70; クロロプラスト; タンパク質の膜透過; フェレドキシン-NADP^+レダクターゼ

本研究は高等植物細胞のオルガネラに局在する分子シャペロンの構造と機能を解析することにより、これらタンパク質による植物細胞のストレス防御系を明らかにすることを目指してしる。本年度はクロロプラストに局在する分子シャペロン、特にシャペロン60(Cpn60)と熱ショックタンパク質70(Hsp70)を取りあげ、タンパク質のクロロプラスト膜の透過、アセンブリーにおけるこれら分子シャペロンの役割を解析した。クロロプラストタンパク質としてはフェレドキシン-NADP^+レダクターゼ(FNR)、フェレドキシン、Rubisco小サブユニット等のcDNAをin vitroで翻訳転写させ、これらの産物をエンドウ葉より調製した無傷クロロプラストに取り込ませた。取り込みの効率はFNRが一番高い結果を与えたので、以後の実験はFNRの輸送系を中心に行った。取り込まれたFNRの前駆体はプロセシングをうけて成熟型のFNRに変換する。この新たにクロロプラストに導入されたFNRとHsp70の相互作用を解析するため、Hsp70特異抗体による免疫沈降を試みた。この結果、導入されたFNRの一部はATPレベルが低い場合にのみHsp70の特異抗体により沈降し、ATPを添加すると沈降は見られなかった。このことから、新たに導入されたFNRはATP濃度が低い条件下においてHsp70と相互作用していることが初めて明らかになった。Cpn60の特異抗体を用いた免疫沈降実験からも同様のFNRの沈降がみられたことから、新たに導入されたFNRはCpn60とも相互作用していることが判明した。これらの分子シャペロンのFNRとの結合は時間に伴って変化し、Hsp70特異抗体によって免疫沈降されるFNRは輸送の初期に一過性であるのに対し、Cpn60抗体ではその後にFNRが沈降された。この結果はFNRはまずHsp70に相互作用し、その後Cpn60と結合することを示唆している。以上の研究により、これら分子シャペロンが新たにクロロプラストに導入されたタンパク質と相互作用していることを初めて明らかにした。

This study is aimed at clarifying the molecular structure and function of higher plant cells. This year, we analyzed the molecular structure, molecular structure, and molecular structure of different species in different regions, such as Cpn60 and Hsp70. The cDNAs of the products such as FNR, FNR, Rubisco, etc. are translated and written in vitro. FNR is the most important transportation system in China. The precursor of FNR is selected from the group consisting of mature FNR. This new approach to Hsp70 interaction analysis and Hsp70 specific antibody immune sedimentation As a result, part of the introduction of FNR is ATP. In the case of Hsp70 specific antibody, ATP is added. The interaction between Hsp70 and ATP was observed at low ATP concentrations. Cpn60 specific antibodies are used in immune sedimentation, and FNR sedimentation is introduced into FNR. The binding of FNR to Hsp70-specific antibodies is a transient response to FNR in the early stages of FNR delivery. The result is that FNR interacts with Hsp70 and Cpn60 binds to it. The above research results show that the molecular structure of the first phase of the second phase of the third phase of the fourth phase of the fourth phase of

项目成果

Strzalka,K.: "Heat shock induces synthesis of plastid‐associated Hsp 70 in etiolated and greening pumpkin cotyledons." Folia Histochem.Cytobiol.32. 45-49 (1994)

Strzalka, K.：“热休克诱导黄化和绿化南瓜子叶中质体相关 Hsp 70 的合成。”Folia Histochem.Cytobiol.32 (1994)。

Tsugeki,R.: "Interaction of homologues of Hsp 70 and Cpn 60 with ferredoxin‐NADP^+ reductase upon its import into chloroplasts." FEBS Lettes. 320. 198-202 (1993)

Tsugeki, R.：“Hsp 70 和 Cpn 60 的同源物与铁氧还蛋白-NADP^+ 还原酶在导入叶绿体后的相互作用。” FEBS Lettes。

槻木竜二: "プラスチッドの分化と分子シャペロン" 植物細胞工学. 5. 387-392 (1993)

Ryuji Tsukiki：“质体分化和分子伴侣”植物细胞工程 5. 387-392 (1993)。