メダカ胚ES細胞の培養とジーントラップ法による初期発生特異的遺伝子の検索

通过培养青鳉胚胎干细胞和基因捕获法寻找早期发育特异性基因

• 批准号: 05275208
• 负责人: 兵頭 昌雄
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05275208/
• 关键词: メダカ; 胚性幹細胞; キメラ; 孵化酵素; フィーダー細胞; ジーントラップ法

1.胚性幹細胞の分離と移植:本研究課題の目的の第一は,胚から分離した細胞の移植によるキメラ・メダカの作製である。昨年の研究によって,メダカの孵化酵素を利用して硬い卵膜を部分消化することでマイクロキャピラリーによる細胞の移植が可能になった。今年度は移植した個体のうち,9匹の雌雄について,移植した細胞が生殖系列に伝達されるかどうかを検討した。9匹のうち,5匹においては,それが産卵した卵の1〜2%に移植した細胞由来のものが含まれていることが確認された。したがって,この研究によってキメラ・メダカでは生殖系列に移植細胞が組み込まれることが明らかになった。2.メダカ胚細胞の培養:メダカ胚から,胚性幹細胞を分離し,フィーダー細胞上に培養した。培養液は,マウスの胚性幹細胞に用いられているものと同等のものを用いた。胚性幹細胞は培養に移したのちも急速に細胞分裂を行ない,また一部の細胞には培養中に分化する傾向が観察された。現在は培養した細胞にキメラ作成能があるかどうかについて検討している。3.メダカ受精卵に対する遺伝子移入:ジーントラップ法を行なうために,メダカの受精卵で第1分裂前に,プロモーターを持たないマーカー遺伝子lacZを注入する実験を行ない,その個体が成熟したのちに,産卵した卵を固定し,X-gal染色をおこなった。50匹以上の個体について検討したが,陽性の卵は認められなかった。

1. の separation と embryonic stem cells transplantation: the purpose of this research topic の の first は, embryo か ら separation し の た cells transplantation に よ る キ メ ラ · メ ダ カ の cropping で あ る. Yesterday in の research に よ っ て, メ ダ カ を の hatching enzyme use し て hard い serosa を partly digested す る こ と で マ イ ク ロ キ ャ ピ ラ リ ー に よ が の る cells transplantation may に な っ た. Our は transplantation し た individual の う ち, nine の male and female に つ い て, transplant し た が reproductive cells series に 伝 da さ れ る か ど う か を beg し 検 た. Nine の う ち, 5 horses に お い て は, そ れ が spawning し の た eggs 1 ~ 2% に transplant し た cell origin の も の が containing ま れ て い る こ と が confirm さ れ た. し た が っ て, こ の research に よ っ て キ メ ラ · メ ダ カ で は reproductive series に transplanted cells が group み 込 ま れ る こ と が Ming ら か に な っ た. 2. Youdaoplaceholder0 embryo cell <s:1> culture :メダカ embryo ら ら, を isolation of embryonic stem cells ら, フィ ダ ダ ダ ダ に に に culture of た on に cells. The culture medium is, ウス, ウス, for embryonic stem cells に, use られて られて る <s:1> と と と と と. Similarly, for <s:1> を を を, use た た. Embryonic stem cells move は cultivate に し た の ち も rapid に cell division line を な い, ま た a の cells に は cultures に differentiation す る tendency が 観 examine さ れ た. Now, にキメラ culture た た cells にキメラ to make がある う う に に に て検 て検 て検 to discuss て て る る. 3. メ ダ カ fertilized egg に す seaborne る heritage 伝 a move: ジ ー ン ト ラ ッ プ line method を な う た め に, メ ダ カ の fertilized egg で に before division 1, プ ロ モ ー タ ー を hold た な い マ ー カ ー posthumous son 伝 lacZ を injection す る be 験 を line な い, そ の mature individual が し た の ち に, spawning し た eggs を fixed し, X - gal dyeing を お こ な っ た. For individuals with more than 50 stuclids, に に て検 て検 て検 are sought for たが, and positive stuclids are identified for められな められな った.

项目成果

Masao Hyodo,Michio Matsuhashi: "medaka chimerns produced by microinjechon of the mid-blastula cells and their germ-line transmission" Journal of Marine Biotechnology. (in press).

Masao Hyodo，Michio Matsuhashi：“中囊胚细胞显微注射产生的青鳉嵌合体及其生殖系传递”《海洋生物技术杂志》。