分離したメダカ胚細胞を培養下で特定組織に分化誘導する因子の研究

离体青鳉胚胎细胞在培养物中分化为特定组织的诱导因素研究

• 批准号: 13878176
• 负责人: 兵頭 昌雄
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13878176/
• 关键词: メダカ; 胚性幹細胞; 心筋; 細胞分化; 培養上清み; タンパク質の精製; 培養上清

我々の研究室では,メダカ胞胚より分離した全能性を持つ細胞を培養し,各種の細胞増殖因子などの効果を検討した。その過程で,メダカ胚より樹立され長期間継代培養を行っている細胞株の培養上清(conditioned medium)を添加したところ,多数の胚細胞が規則的に収縮を繰り返す心筋へと分化することを見出した。この研究の目的は,上に述べた培養上清に含まれる因子を同定することである。昨年度の研究で分化誘導のバイオアッセイを行うための条件を決定し、安定なアッセイ系を確立することができた。今年度においては,培養上清に含まれる因子の精製を目的として研究を行った。多量の培養上清を硫安分画したのち,活性を含む部分をさらに各種のクロマトグラフィーで分画した。精製が進むにしたがって活性が失われる困難があったが,これはタンパク質が壁面に吸着するためであることがわかり,またそれを回避する方法が見出された。このため,精製をさらに進めることができ,現在約40,000倍程度に精製されている,まだ単一のタンパク質を得るところまでは到達していないが、近い将来その目的が達成できるものと考えている。これまでこの因子の分画精製から得られている知見は,このタンパク質は塩基性で弱いヘパリン結合性を示し,またその分子量は約2万と推定される。こうした性質には,これまで知られている細胞増殖因子や分化因子とは異なる点があり,その特異な機能と合わせて新規のタンパク質である可能性があると考えている。今後さらにこの因子の精製を進め,単一タンパク質として得られたらそのアミノ酸配列を決定し,その情報をもとに遺伝子をクローン化する方向で研究を進めていく予定である。

Our laboratory has been studying the effects of various cell growth factors on cell culture in vitro. During this process, embryos were established and cultured for a long period of time. The conditioned medium of the cell line was added to the medium, and most of the embryos were cultured regularly. The purpose of this study is to identify the factors involved in culture supernatant. The research conducted last year determined the conditions for differentiation and stability. This year, the culture supernatant contains factors for purification purposes. A large amount of culture supernatant was collected, and the activity of the supernatant was analyzed. The method of purification is difficult to find, and the method of purification is difficult to find. This is the beginning of refinement. Now it is about 40,000 times more refined, and the quality of a single piece of cake is obtained. This will achieve the goal of reaching the goal in the near and future. The molecular weight of the compound is estimated to be about 20,000. The nature of the cell growth factor and differentiation factor is different, the specific function is different, the new quality is different, and the possibility is different. In the future, the refinement of these factors will be improved, and the quality of the products will be determined. The information will be transmitted to the customers and the direction of the research will be determined.