权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

胚性幹細胞を利用した遺伝子改変ニワトリの作出に関する研究

利用胚胎干细胞培育转基因鸡的研究

基本信息

批准号：
10J08240
负责人：
中野幹治
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,新規のニワトリ胚性幹(cES)細胞を利用して,遺伝子改変ニワトリを作出することを目的として実施した.本年度は,遺伝子組換えcES細胞由来の後代取得と効率化が可能であるか検証を行った.本研究では,相同遺伝子組換えを含め遺伝子操作後のcES細胞を移植したキメラニワトリから4,000羽を超えるヒナの確認を行ったが,cES細胞由来の後代は取得出来なかった.この原因の一つには,核型異常が考えられた.本研究では,cES細胞中に遺伝子操作前であっても2-10%程度の核型異常細胞が存在し,特にランダムインテグレートで遺伝子導入した細胞では,この割合が90%を超えることが明らかとなった.そのため,生殖細胞が正常に機能できないのではないかと考えられた.一方で,クローニング後の細胞や,相同遺伝子組換えで遺伝子導入した細胞では,核型異常細胞の割合が導入前と同程度まで低下しており,正常な核型の維持に向け有効な手段と考えられた.また目的の後代が得られない原因には,生殖細胞へ分化したcES細胞の数が少ないことも考えられた.本研究では,この点を改善するためin vitro分化誘導条件の検証を行ったが,cES細胞におけるニワトリ生殖系列特異的遺伝子(Cvh)の発現を向上させる条件の解明には至らなかった.そのため,本研究ではcES細胞を移植した胚からキメラの始原生殖細胞を回収し薬剤選抜を行った.その結果,緑色蛍光タンパク質を発現し,かつCvh陽性の細胞が培養可能であった.この手法は,今後生殖細胞への分化効率を向上させる上で有効な手法になり得ると考えられる.本研究では,目的の遺伝子改変ニワトリ個体作出には至らなかったものの,必要な基盤技術の証明にはほぼ成功しており,今後の研究によってニワトリにおいてノックイン・ノックアウトを含めた遺伝子改変技術を実用化させることが可能になるものと考えられる.

This research is based on the purpose of using new embryonic stem (cES) cells, and the purpose of this research is to change the original embryonic stem (cES) cells. , It is possible to obtain more efficient progeny by replacing cES cells with cES cells. This study shows that the same genetic subgroups were replaced after the same operation.のcES cell transplantation したキメラニワトリから4,000 feathers を超えるヒナのconfirmation を行ったが, the progeny of the origin of cES cells was obtained なかった.この一つには, karyotype abnormality, karyotype abnormality, karyotype abnormalities. In this study, karyotype abnormalities of 2-10% degree were detected in cES cells before the operation. The cells exist, and the special cells are introduced into the cellsでは,この合が90%を超えることが明らかとなった.そのため, the function of germ cells is normal and the function is normal. One partyで, クローニング后のcellや, the same remaining 伝 subgroups are replaced えで缝子 imported したCell type, cells with abnormal karyotype are reduced to the same degree before introduction, normal karyotype is maintained, and effective means are used. The cause of the offspring's failure and the differentiation of germ cells and the number of cES cells are low. This study is based on the improvement of the number of cES cells. The in vitro differentiation induction conditions are different, and the cES cells are specific for the reproductive series. The remaining condition of the remaining child (Cvh) is the condition of the condition. This studyではcES cells をtransplantationしたembryoからキメラのprimordial germ cells をrecovery し薬剤选抜を行った.そのAs a result, it was possible to culture the green Cvh-positive cells and use them. In the future, the differentiation efficiency of germ cells will be higher and the efficiency will be higher. .The purpose of this study is to change the original structure of the individual to create a necessary basis for the original work. Proof of technology is a success, future research is a successックアウトを有めた伝子椉技术を実用化させることがpossibleになるものと考えられる.