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HCVレプリコンシステムを用いた薬剤感受性規定領域の検討

使用 HCV 复制子系统检查药物敏感性定义区域

基本信息

批准号：
16590615
负责人：
加藤孝宣
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

HCVは世界中に多くの感染者が存在する重大な感染症の一つである。しかし、その治療はインターフェロン(IFN)を中心とした治療に頼っているのが現状である。その大きな原因は、HCVの培養が不可能であり抗ウイルス剤の効果を十分評価できないことにある。我々はHCV遺伝子型2aのプリコンからレポーター遺伝子を持ったレプリコンを作成し、HCVの増殖を簡便に検出でき、各種抗ウイルス剤に対する感受性を高感度に評価可能な系を樹立した。HCV遺伝子型2aのプリコンのネオマイシン耐性遺伝子をルシフェラーゼ遺伝子に置換したレプリコンシステムを新たに構築した。このレポーターレプリコンをトランスフェクション後、4時間で細胞内のルシフェラーゼ活性を測定し遺伝子導入効率のコントロールとした。その後IFNやリバビリン(RIB)等の抗ウイルス剤を加え、経時的に24時間、48時間、72時間後のルシフェラーゼ活性を測定することでレプリコンの増殖を評価した。レポーターレプリコンをトランスフェクション後、抗ウイルス剤を添加しない状態ではルシフェラーゼ活性は時間経過とともに指数関数的に上昇した。IFNやRIBの投与によりレプリコンの増殖は用量依存的に抑制された。臨床用量ではIFNは99%以上、RIBは約40%の増殖抑制効果を示し、RIBの抗ウイルス作用はIFNに比べかなり弱いと考えられた。またIFNとRIBの同時投与では、相加的にレプリコンの増殖が抑制された。この新たなレポーターレプリコンシステムを用いることにより、IFNやRIBの用量依存的な抗HCV効果の検出が可能であった。この高感度で正確なシステムを用いることにより、HCVに対する抗ウイルス効果のある新たな薬剤の探索が可能となると考えられた。

There are many HCV infections in the world. The current situation of IFN treatment The reason why HCV culture is impossible is that the effect of HCV culture is highly evaluated. We have established a system for the identification of HCV genotype 2a, a simple method for HCV propagation, and a high sensitivity to various anti-HCV agents. HCV gene type 2a is a new type of gene that can be transformed into a new gene. After 4 hours, the intracellular activity of the protein was measured and the protein introduction rate was determined. After the addition of IFN-2, IFN-3, RIB, etc., the activity of RIB was measured at 24, 48, and 72 hours. The number of active substances increases after the initial reaction. IFN and RIB administration are dose-dependent inhibitors of proliferation. Clinical dosage is more than 99% IFN, RIB is about 40% growth inhibition effect, RIB anti-IFN effect is weaker than IFN The simultaneous administration of IFN and RIB inhibits the proliferation of RIB. This new type of anti-HCV antibody can be detected in the presence of IFN and RIB. This high sensitivity test results in the detection of HCV infection.