慢性肝障害モデルマウスを用いたC型肝炎ウイルスによる肝発癌機構の解析

慢性肝损伤模型小鼠丙型肝炎病毒致肝癌机制分析

• 批准号: 14770266
• 负责人: 加藤 孝宣
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770266/
• 关键词: HCV; トランスジェニックマウス; 化学発癌; 四塩化炭素; ジエチルニトロサミン

我々はHCVコアのトランスジェニックマウス(Tgマウス)に四塩化炭素(CCl4)を腹腔内投与、もしくはジエチルニトロサミン(DEN)を経口投与することにより肝障害を誘導し、肝腫瘍発生モデルを構築した。今年度はこの肝腫瘍モデルにおける肝障害の遺伝子異常に与える影響として、癌抑制遺伝子の突然変異誘導について検討を行った。肝炎誘導により肝腫瘍が発生したマウスの腫瘍部、非腫瘍部それぞれよりゲノムDNAを抽出し、これまでに報告されているマウスの癌抑制遺伝子であるp-53、N-・H-・K-ras、βカテニンの各遺伝子についてSingle Strand Conformation Polymorphism法(SSCP法)を用い点突然変異の有無について検討した。p53はエクソン5,6,7,8について、N-・H-・K- rasはそれぞれエクソン1,2について、βカテニンはエクソン2についてSSCPが可能な大きさのフラグメントができるようにプライマーを設定した。[r-32P]ATPでプライマーをkinationした後PCRを施行、5%アクリルアミドゲルで展開しbandを観察した。二個体の腫瘍部、非腫瘍部について比較検討したが有意な点突然変異と考えられる異常なバンドは認めなかった。次に遺伝子不安定性の検討のためマウスのマイクロサテライトマーカーを用いたマイクロサテライトインスタビリティの検討を行った。ほとんどの染色体を網羅するように28組のマイクロサテライトマーカーのプライマーセットを設定した。これらのプライマーを[r-32P]ATPでkinationし、PCRを行いバンドの移動や欠損をかんさつすることによりインスタビリティやLOHの検出を試みた。こちらも二個体の腫瘍部、非腫瘍部について比較検討したが有意なインスタビリティやLOHと考えられる異常は検出されなかった。以上のように今回の検討では我々の作成した肝腫瘍発生モデルの原因と考えられる遺伝子異常は検出されなかった。しかし今後さらに他の癌抑制遺伝子などについて詳細な検討が必要と考えられた。

We said that HCV (Tg), carbon (CCl4), carbon (CCl4) were injected intraperitoneally, and that DEN was given orally. This year, the children with liver disease are often affected by the disease, and the cancer suppressants are suddenly affected by the disease. Hepatitis B virus infection caused by hepatitis virus infection in the liver, liver P53, ras, 5, ras, 5, 7, 7, 5, 5, 5, 5, 7, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, [rmur32p] after the implementation of PCR, 5% of the ATP has been implemented and the band has been launched. [rmur32p] after the implementation of the PCR, the band has been launched. There are two parts of the body and the other parts of the body. There is a sudden increase in the number of people who are interested in the examination. The second time, the child is unstable, and the child is unstable.

项目成果

Kato T., Miyamoto M.et al.: "Processing of hepatitis C virus core protein is regulated by its C-terminal sequence."Journal of Medical Virology. 69. 357-366 (2003)

Kato T.、Miyamoto M.等人：“丙型肝炎病毒核心蛋白的加工受其 C 末端序列调节。”医学病毒学杂志。

Date T., Kato T.et al.: "Genotype 2a Hepatitis C Virus Subgenomic Replicon Can Replicate in HepG2 and IMY-N9 cells"J Biol Chem. (In press). (2004)

Date T.、Kato T.等人：“基因型 2a 丙型肝炎病毒亚基因组复制子可以在 HepG2 和 IMY-N9 细胞中复制”J Biol Chem。

Kato T., Miyamoto M.et al.: "Repeated hepatocyte injury promotes hepatic tumorigenesis in hepatitis C virus transgenic mice."Cancer Science. 94. 679-685 (2003)

Kato T.、Miyamoto M.等人：“反复的肝细胞损伤促进丙型肝炎病毒转基因小鼠的肝脏肿瘤发生。”癌症科学。

Kato T., Date T.et al.: "Efficient replication of the genotype 2a hepatitis C virus subgenomic replicon."Gastroenterology. 125. 1808-1817 (2003)

Kato T.、Date T.等人：“基因型 2a 丙型肝炎病毒亚基因组复制子的有效复制。”胃肠病学。