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抗HIV抗体の新しい超高感度測定法の開発と実用性の検討

抗HIV抗体超灵敏测定新方法的开发及其实用性检验

基本信息

批准号：
01653009
负责人：
石川栄治
金额：
$ 1.6万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

抗HIV抗体の検出法については2つの問題点がある。その1つは測定感度である。測定感度については、抗インスリン抗体と抗サイログロブリン抗体をモデルとして、従来法より1,000倍ないしそれ以上高感度化できる測定システムを開発した。つまり、従来法では血清などの測定試料中の非特異イムノグロブリンが非特異的に抗原不溶化固相に吸着するために測定のバックグラウンドが高くなり、高感度化ができなかった。そこで、抗原坑体結合物を1つの固相上にトラップして固相を洗浄することにより大部分の非特異イムノグロブリンを除去した後、抗原抗体結合物を固相から溶出して別の新しい固相へ移すことにより、最初の固相に結合していた非特異イムノグロブリンを一層完全に除去して、測定のバックグラウンドを格段に低下させ超高感度化を達成した(免疫複合体転移測定法)。抗原抗体結合物の固相へのトラップと溶出はジニトロフェニル基と抗ジニトロフェニル抗体、ビオチンとアビジンなどを用いて行った。もう1つの問題点は病原ウイルスそのものを抗原として用いれば非能率的で危険を伴うことである。この点を克服するためにHIVの部分ペプチドを用いる計画をたてた。まず、HTLVーIのgag(14ー139)ーenv(197ー295)を用いて免疫複合体転移測定法を試みたところ、HTLVーIそのものを使うゼラチン粒子擬集法やウエスタンブロット法より1,000〜3,000倍高い感度の測定法が可能となった。このことは不溶性のペプチドでも免疫複合体転移測定法の高感度が可能なことを示す点で大きな意味があった。gpー46(188ー205)を用いてもほぼ同様の結果が得られた。そこで、HIVのgpー41(586ー606)を用いて免疫複合体転移測定法を試みたところ、gpー41(586ー606)を用いる従来からのELISA法より数百倍高感度となることがわかったが、これでは検出できないHIVキャリアー血清のあることがわかり、さらに有効なペプチドを準備中である。

Anti-HIV antibody detection method is very difficult.その1つは测定感度である。The sensitivity of the assay was determined by using a 1,000-fold increase in the number of anti-virus antibodies and anti-virus antibodies. The non-specific antigen-insoluble solid phase adsorption in the serum sample is determined by the method of detection and detection, and the sensitivity is high. The antigen-antibody conjugate is dissolved in the solid phase, and the first solid phase is separated from the first solid phase, and the first solid phase is separated from the first solid phase, and the second solid phase is separated from the first solid phase. Determination of the level of hypoallergenic and hypersensitive DNA (immune complex shift assay) Antigen-antibody conjugate solid phase dissolution, anti-antibody, anti-virus, anti-virus, anti-virus The problem is that the pathogen is not safe. This is a plan to overcome HIV. HTLV-1 gag(14 - 139) env(197 - 295) is used to test the immune complex migration assay. HTLV-1 particle simulation method is used to test the sensitivity of 1,000 ~ 3,000 times. The high sensitivity of this insoluble immune complex shift assay is possible and significant. gp-46(188 - 205) is used in the same way. HIV gp41 (586 - 606) was tested by ELISA with hundreds of times higher sensitivity.