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抗HIV抗体の新しい、超高感度で簡便な測定法の開発と実用性の検討

新型超灵敏、简便的抗HIV抗体测定方法的开发及其实用性检验

基本信息

批准号：
03219214
负责人：
石川栄治
金额：
$ 1.79万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

HIVそのものを抗原とする従来からの抗HIV抗体の測定法の欠点を解消するために、研究代表者らが創案した新しい酵素免疫測定法(免疫複合体転移酵素免疫測定法)を改変し、recombinant proteinを抗原とする抗HIV抗体の測定への応用を試みた。血清中の抗HIV IgG、DNP化recombinant protein、酵素標識recombinant proteinの3者を同時に反応させ、形成された免疫複合体を抗DNP抗体不溶化固相の上にトラップした。固相を洗浄した後、売剰のDNPーリジンにより免疫複合体を固相から溶出し、(抗ヒトIgG γ鎖)抗体不溶化固相に移しかえ、最後の固相に結合した酵素活性を測定した。DNP化recombinant proteinと(抗ヒトIgG γ鎖)抗体不溶化固相の代りに、DNP化ビオチン化recombinant proteinSストレプトアビジン不溶化固相を用いて、IgGを含むすべての抗体を測定する方法も試みた。その結果、大腸菌βーDーガラクトシダ-ゼ標識recombinant p24を調製することができ、従来法より300〜3,000倍高感度となった。recombinant RTは溶解度が低く、ゲル濾過材にも吸着しやすいので、SDSあるいはTriton x100存在下で西洋ワサビ・ペルオキシダ-ゼにより標識した結果、従来法より100倍以上高感度となった。これらの方法によりノン・キャリア-の血清をテストしたところ、一部の血清に抗p24抗体、抗RT抗体の存在を認めた。HTLVーIの3種類の部分合成ペプチドとrecombinant p24を用いる同様の高感度測定法でも、ノン・キャリア-の血清に抗ペプチド抗体、抗p24抗体が検出されるが、これらすべてに対する抗体をもつノン・キャリア-の血清は極めて少く、キャリア-の血清では、これらのうち少くとも3つに対する抗体が検出されることによりノン・キャリア-とキャリア-を区別できることがわかったので、HIVのキャリア-とノン・キャリア-も同様にして識別するために、多数のHIVのrecombinant proteinsを用いて高感度測定法を開発中である。

The study was conducted on behalf of a new enzyme immunoassay (immunocomplex enzyme immunoassay) for the determination of anti-HIV antibodies. Anti-HIV IgG, DNP recombinant protein and enzyme marker recombinant protein in serum are simultaneously reacted to form immune complexes and anti-DNP antibody insoluble solid phase. The enzyme activity was determined by the solid phase elution of the DNP and the insoluble antibody (IgG γ lock). DNP recombinant protein and (anti-IgG gamma lock) antibody insoluble solid phase generation, DNP recombinant protein and (anti-IgG gamma lock) antibody insoluble solid phase generation, DNP recombinant protein and (anti-IgG gamma lock) antibody detection method. Results, Escherichia coli beta D- In the presence of Triton x100, the solubility of recombinant RT is low, and the sensitivity is more than 100 times. The method of identification of anti-p24 antibody and anti-RT antibody in serum The three types of HTLV I are partially synthesized and recombinant p24 is used. The same high sensitivity assay is used to detect anti-HTLV antibodies and anti-p24 antibodies. For example, most HIV recombinant proteins are being developed using a high sensitivity assay.