硝酸塩誘導型チトクロムPー450の機能解明と遺伝子のクロ-ニング

硝酸盐诱导的细胞色素 P-450 的功能阐明和基因克隆

• 批准号: 02217203
• 负责人: 祥雲 弘文
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02217203/
• 关键词: チトクロムPー450; 脱窒; フサリウム; 亜硝酸塩還元酵素

1.不完全菌<Fusarium>___ー <oxysporum>___ーに、真核生物として初めて脱窒能が見出されたが、この脱窒系における重要なステップに関よる酵素,亜硝酸塩還元酵素活性を無細胞系で再構成することに成功した。活性を含む菌体抽出液より各成分を精製あるいは部分精製し、NADHーフェナジンメトサルフェ-ト(PMS)系を電子供与体とした再構成実験により各成分の機能を調べた。その結果、非分画抽出液中に検出される脱窒活性、すなわち亜硝酸塩から亜酸化窒素(N_2O)を生成する活性は、中間体として一酸化窒素(NO)を形成していることが確認された。さらに前半の亜硝酸塩還元酵素(NiR)と後半の一酸化窒素還元酵素(NOR)の両活性の分離に成功した。硝酸塩誘導型チトクロムPー450(Pー450dNIR)は後半のNOR活性に関与することが示された。このように、ユニ-クなカビの脱窒系が分子レベルで明らかにされつつあり、近い将来にその全体像が解明されであろう。2.Pー450dNIRの抗体を用い、mRNAからcDNAを取得することに成功した。その塩基配列から予想されるアミノ酸一次配列は、P450として極めてユニ-クな特徴を示した。他のP450との相同性の比較から、Pー450dNIRは真核生物より原核生物(細菌)のP450に近く、進化の系統樹においても例外的に細菌のグル-プに分類された。さらに真核生物にみられるN末付近の疎水領域やプロの配列も存在せず、予想通り本P450が真核生物として初めての可溶性P450であることが示された。これらの性質やその機能はP450として前例が無く、構造.機能.進化などの諸点において極めて興味深い課題を示した。本Pー450はこの分野で大いに注目されつつある。

1. In incomplete bacteria<Fusarium><oxysporum>, eukaryotes, and early stages of inactivation, enzymes related to inactivation, nitrate reductase activity, and cell line recombination were successfully observed. The active substance is extracted from the bacteria, and the components are refined, partially refined, NADH and PMS are electron donors, and the functions of the components are adjusted. As a result, the activity of N_2O in the production of nitric acid and the formation of NO in the production of nitric acid were confirmed. The activities of nitrate reductase (NiR) and nitrate reductase (NOR) in the first half and the second half were successfully isolated. Nitric acid induced type P-450(P-450dNIR) is related to NOR activity in the latter half. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. 2. P-450dNIR antibody was successfully used, mRNA and cDNA were obtained. The primary alignment of P450 and P450 is shown in the figure below. Comparison of identity between P450s and P450s in eukaryotes, prokaryotes (bacteria), and phylogenetic trees, with the exception of bacteria. In eukaryotes, there is no soluble P450 in the near future. P450-P450-P450- function. The evolution of the various points of the extremely interesting topic This P-450 is a big part of the division.

项目成果

木澤 秀樹: "Nucleotide sequence of the unique nitrate/nitriteーinducible cytochrome Pー450 cDNA from <Fusarium>___ー <oxysporum>___ー" the Journal of Bilogical Chemistry. 226. (1991)

Hideki Kizawa：“<Fusarium>___－ <oxysporum>___－ 的独特硝酸盐/亚硝酸盐诱导型细胞色素 P-450 cDNA 的核苷酸序列”，《生物化学杂志》226。（1991）

谷本 達夫: "Components of the unique fungal denitrifying system of <Fusarium>___ー <oxysporum>___ー" the Journal of Biological Chemistry.

Tatsuo Tanimoto：“<Fusarium>_____ <oxysporum>_____ 独特的真菌反硝化系统的组成部分”《生物化学杂志》。