哺乳類の卵および胚の成熟分化過程の研究:単一卵の定量的解析

哺乳动物卵和胚胎的成熟和分化过程研究：单个卵的定量分析

• 批准号: 02222203
• 负责人: 加藤 尚彦
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02222203/
• 关键词: 卵; 初期胚; デオキシグルコ-ス; エネルギ-代謝; ヘキソキナ-ゼ; EGF; 受容体

マウスとヒトの単一卵と単一初期胚について以下の結果を得た.1)人工受精の際の余剰卵(intact germinal vesicle stage,243±34ng乾燥重量,10個の平均±SD)のhexokinaseの活性は17.9±3.6pmol/卵/時であり,マウスの胞胚とほぼ同じ活性値を示した.乾燥重量当りの比活性値はマウスの8.9%(乾燥重量は9.6倍)であるので,今後ヒトの胚を分析する時は,マウスの時の1/10の感度で十分である.2) ^<18>FーDG取り込みの予備実験として, ^3HーGDの単一マウス卵による取り込みを検討した.25mM ^3HーDG(17Ci/mmol)でmodified BWW培養液(4μl)のglucoseを置き換えて胚一個を培養する系を確立した.一時間の培養による取り込みは2ーcell stageの単一胚(165±104cpm,または7.72±4.86fmol,卵6〜10個の平均±SD以下同じ),4ーcell(232±227,10.9±10.6),8ーcell(700±241,33.0±11.4),morula(1845±1703,87.0±80.3),blastocyst(7463±5672,351±267)となり,胚の発育に伴って急激に増加した.この取り込みは昨年度に明らかにした様にDG+deoxyglucose 6ーphosphateの量を表しているが, ^<18>FーDGを用いる時の技術を確立し基礎デ-タが得られた. ^<18>FーDGは末だ利用が許されない状態なので,次年度に行う予定である.3)マウスの単一卵・胚20〜30個を35nM ^<125>ーIーEGF(epidermal growth factor,410000dpm)を含む5μIのmodified BWW培養液中で2時間培養し,細胞膜の受容体に結合したEGFとinternalizeされたEGFの総和を計測効率84%でγ線測定する系を確立した.一個の卵・胚に対するEGFの特異的結合は,未受精卵(38amol,以下同じ)から1ーcell(478),2ーcell(552),4ーcell(440),8ーcell(737),morula(953)へと増加した.これらの結果は,EGFが初期胚の成熟分化の過程で重要な役割を果たしていることを意味する.

マ ウ ス と ヒ ト の 単 one egg と 単 an early embryo に つ い て を た. の results below 1) artificial insemination の interstate の more than turning the eggs (intact germinal vesicle Stage, compared to 243 + 34 ng, dry weight, average + / - SD) 10 の の hexokinase の active は 17.9 + / - 3.6 pmol/eggs / で あ り, マ ウ ス の cell embryo と ほ ぼ with numerical を じ activity in し た. Dry weight when り の than active numerical は マ ウ ス の 8.9% (dry weight は 9.6 times) で あ る の で, future ヒ ト の embryo を analysis す る は, マ ウ ス の の 1/10 の sensitivity で very で あ る. 2) ^ < > 18 F ー DG り 込 み の reserve be 験 と し て, ^ 3 h ー GD の 単 a マ ウ ス eggs に よ る take り 込 み を beg し 検 た. 25 mm ^ 3 h ー DG (ci/tendency for 17) で modified 4 mu (l) の BWW cultures of glucose を buy き in え て embryo a を cultivate す を る department establish し た. For a moment, <s:1> culture による take 込み 込み 込み 2 による cells A stage の 単 embryo (165 + 104 CPM, ま た は 7.72 + / - 4.86 fmol, eggs with under 6 ~ 10 average + / - SD の じ), 4 ー cell (232 + 227,10.9 + / - 10.6), 8 ー cell (700 + 241,33.0 + / - 11.4), morula (1845 + ,87.0 1703 + / - 80.3), the blastocyst (7463 + 5672351 + 267) と な り, embryo の 発 yukon に with っ て nasty shock に raised plus し た. こ の take り 込 み は yesterday annual に Ming ら か に し た others に DG + deoxyglucose 6. Amount of diphosphate を table て るが るが ^ < > 18 F ー DG を with い る の technology based デ を established し - タ が have ら れ た. ^ < > 18 F ー DG は だ at the end of the use of が xu さ れ な い state な の で, annual line に う designated で あ る. 3) マ ウ ス の 単 one egg, embryo 20 ~ 30 を 35 nm ^ < 125 > ー I ー EGF (epidermal Growth factor, contains 410000 DPM) を む 5 mu I の modified BWW medium, cultivate し で 2 time, cell membrane の is let body に combining し た EGF と internalize さ れ た EGF の 総 and を measuring working rate 84% で gamma line measurement す を る department establish し た. A の に egg, embryo す seaborne る EGF の specific は, unfertilized egg (hereinafter with じ, 38 amol か ら 1 ー cell (478), 2 ー cell (552), 4 ー cell (440), eight ー cell (737), morula (953) へ と raised plus し た. こ れ ら は の results, EGF が early The process of embryonic <s:1> maturation and differentiation <e:1> is で important な division, を fruit た <s:1> て る る とを とを means する.

项目成果

Murashima,Y.L.,Ishikawa,T.and Kato,T.: "γーAminobutyric acid system in developing and degenerating mouse retina" Journal of Neurochemistry. 54. 893-898 (1990)

Murashima, Y.L.、Ishikawa, T. 和 Kato, T.：“小鼠视网膜发育和退化中的 γ-氨基丁酸系统”《神经化学杂志》54. 893-898 (1990)。

加藤 尚彦: "神経生化学:2・7章,3・2章 日本生化学会編" 東京化学同人, 15 (1990)

加藤直彦：《神经生物化学：日本生物化学会编辑的第2章和第7章、第3章和第2章》东京化学同人，15（1990）

Tsutsumi,O.,Yano Satoh,K.,Mizuno,M.and Kato.T.: "Studies of hexokinase activity in human and mouse oocyte" American Journal of Obstetrics and Gynecology. 162. 1301-1303 (1990)

Tsutsumi,O.、Yano Satoh,K.、Mizuno,M. 和 Kato.T.：“人类和小鼠卵母细胞己糖激酶活性的研究”美国妇产科杂志。

Kato,T.and Akabayashi,A.: "Characteristics of energy metabolism in single motor neurons and anterior horn obtained from rat spinal cord" Journal of Neurological Science. 98(Suppl.). 89 (1990)

Kato,T. 和 Akabayashi,A.：“从大鼠脊髓获得的单个运动神经元和前角的能量代谢特征”神经科学杂志。

加藤 尚彦: "単一ニュ-ロンの生化学" 蛋白質・核酸・酵素. 28. 442-453 (1990)

Naohiko Kato：“单个神经元的生物化学”蛋白质、核酸和酶 28. 442-453 (1990)。