ニンジン不定胚形成過程における細胞の機能分化

胡萝卜体细胞胚胎发生过程中细胞的功能分化

• 批准号: 02242212
• 负责人: 増田 清
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Akita Prefectural College of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02242212/
• 关键词: 細胞培養; ニンジン; 不定胚; 全能性; 核タンパク

ニンジンの培養細胞を、無菌条件下で発芽した芽生えの下胚軸片から2,4ーDを含む栄養培地を用いて誘導し、液体培養によって継代維持した。数回の植え継ぎの後、培養細胞が胚を分化することを確認し、その保存培養の一部を凍結し液体窒素中に保存した。残りの細胞は植え継ぎを続け、auxinを含まない培地に移しても胚の分化が見られなくなった。時点で、凍結保存しておいた細胞を解凍し培養に移した。このようにして単一の組織片を起源とし、胚分化能が異なる細胞を調製することができた。次いで、これらの細胞から核を単離した。効率よく核を単離するために細胞をまず細胞壁分解酵素で短時間処理し、磨砕と濾過、非イオン界面活性剤による洗浄、分画遠心、Percoll密度勾配遠心などの操作を組み合わせることによって細胞質由来の夾雑物のほとんど無い純粋な核を得た。得られた核の塩基性蛋白を比較するために希硫酸可溶性の蛋白を抽出し、二次元ポリアクリルアミゲル電気泳動により展開した。電気泳動は一次元を酢酸ー尿素ーTriton Xー100、二次元をSDSとした。その結果、SDSの系から求められる分子量が39KDaと40KDaの二種の蛋白に著しい量的違いが認められた。これら39kDaと40kDa蛋白量の変動がニンジン細胞における一般的な現像であるか否かを検討したところ、継代期間の延長に伴い、みかけの分子量40kDaの蛋白が減少することが、複数のcell lineで共通に確認された。この蛋白は電気泳動による相対的移動度と5%PCAに可溶である性質に基づいて、histone H1あるいはそのvarianの一種であると推察された。二次元電気泳動像では40kDaの近傍に39kDaと量的に安定している別の蛋白が主要な成分として認められ、これらもhistone H1様の挙動を示した。しかし、これら二つの成分は5%PCAにほとんど不溶であり、40kDaとそれらの類緑関係について推定するに至っていない。

The cultured cells were cultured under aseptic conditions, and the hypocotyls were cultured in medium and maintained in liquid culture. After several cycles of cultivation, the cultured cells were identified for embryo differentiation, and part of the culture was preserved in frozen liquid. The cells of the remnant are divided into two parts: one part is cultured and the other part is cultured. Time, freezing, preservation, thawing, culture The origin and differentiation of embryonic cells can be regulated by different cell types. In the middle of the day, the cells were separated from the nucleus. The cell wall decomposition enzyme is used for short-time processing, grinding and filtration, and the non-white interface active agent is used for washing, separating and matching the remote center, and the operation is combined. The results showed that the protein content of the protein was higher than that of the protein content of the protein. The first element of electricity is Triton X, the second element is SDS. As a result, SDS has a molecular weight of 39KDa and 40KDa, and two proteins have a molecular weight of 40KDa. Changes in the amount of protein between 39kDa and 40kDa were identified in common with changes in cell lines, such as changes in the amount of protein between 39 kDa and 40kDa. This protein has a relative mobility of 5% PCA and a molecular weight of 5% PCA. The 2D electrokinetic image shows that the 40kDa and 39kDa components of the protein are stable, and the major components of the protein are stable, stable, and stable. The two components are 5% PCA, 40kDa and 40kDa.

项目成果

Masuda ら: "A simple procedure for the isolation of pure nuclei from carrot embryos in synchronized cultures."

Masuda 等人：“在同步培养物中从胡萝卜胚胎中分离纯核的简单程序。”