血液細胞産生の調節に関する基礎的解析ー幹細胞の濃縮・純化とその機能の解析ー

血细胞生成调控的基础分析 - 干细胞的浓缩、纯化及其功能分析 -

• 批准号: 02256105
• 负责人: 溝口 秀昭
• 金额: $ 22.4万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02256105/
• 关键词: 造血幹細胞; CD34; 細胞周期; トランスジェニックマウス; gp55遺伝子; GーCSFレセプタ-; 巨核球コロニ-; T細胞

1.幹細胞の濃縮・純化・増幅:ヒト骨髄細胞からFACSを用いてCD34^+細胞を集め、3個に1個が造血幹細胞に近い細胞であり、そのうちCD33^ー細胞が多能性幹細胞であることを明らかにした。さらに純化を進めるための抗cーkit抗体および抗gp130抗体は入手している。マウスCD34に関してはILー1で刺激したマウス間質細胞株(PAー6)のcDNAlibraryから既に遺伝子のクロ-ニングを行った。幹細胞の増幅に用いるSCFも発表者のZseboから入手した。2.多能性幹細胞の細胞周期の調節:幹細胞の分裂の状態の映画撮影法が確立し、細胞周期の解析可能となった。SCIDマウスは既に繁殖し、使える状態である。3.各種増殖関連遺伝子を挿入したトランスジェニックマウスにおける造血幹細胞の挙動:フレンド白血病ウィルスgp55遺伝子を導入したトランスジェニックマウスを作成し、赤白血病発症にはgp55以外にFv_2座、p53遺伝子の関与が必要であり、それ以外に未知の遺伝子が白血病発症初期に関与していることも明らかにし、その同定にほぼ成功した。4.造血幹細胞より顆粒球マクロファ-ジ系細胞の分化:GーCSFの活性のあるエピト-プをモノクロ-ナル抗体を用いて検索し、アミノ酸配列23ー44番目の近傍がGーCSFのレセプタ-結合ドメインであると推定した。5.リンパ球の初期分化と造血幹細胞:胎児胸腺の臓器培養系へ骨髄細胞や胸腺細胞を注入して分化能を検討し、胸腺中のThy^ー細胞群にはCD4^ー8^ーの細胞より未熟で骨髄中の幹細胞に近い細胞が存在し、多能性幹細胞も存在することを明らかにした。6.巨核球・血小板産生:溝口らが開発した無血清の巨核球コロニ-法を用い、種々のサイトカインの影響を検討した。その結果、分化の初期にILー3とGMーCSFが作用し、後期にエリスロポエチン.MーCSF、ILー6が作用し、ploidyを増す作用のあることを明らかにした。また、ILー6をサルに注射すると血小板数が増加することを示した。

1. Stem cell concentration, purification and amplification: bone marrow cells, FACS, CD34^+ cells, 3, 1, hematopoietic stem cells, CD33^cells, pluripotent stem cells. The anti-c-kit antibody and anti-gp 130 antibody were purified. CD34 is the key to IL-1 stimulation and cDNA library of stromal cell line PA-6. Stem cell proliferation is the first step in SCF development. 2. Cell cycle regulation of pluripotent stem cells: mapping of the division state of stem cells to establish the possibility of cell cycle analysis. SCID is the state of reproduction. 3. A variety of genetic-related genes were introduced into the hematopoietic stem cells: leukemia gp55 gene was successfully introduced into the hematopoietic stem cells, and the relationship between Fv_2 gene and p53 gene was successfully established. 4. Hematopoietic stem cell differentiation in granulocyte lineage: G-CSF activity, G-CSF binding, G-CSF activity, G-CSF binding, G-CSF binding, G-CSF binding 5. Early differentiation and hematopoietic stem cells in the thymus: fetal thymus organ culture system, bone marrow cells, thymocytes, thymocytes, CD4^8^cells in the thymus, immature bone marrow stem cells, and pluripotent stem cells. 6. Megakaryocyte and Platelet Production: A Study of the Effects of Serum-Free Megakaryocyte Production on the Development and Use of Megakaryocyte In the early stage of differentiation, IL-3 and GM-CSF play a role, and in the late stage, IL-6 play a role. The number of platelets increased after injection.

项目成果

Teramura M,Mizoguchi H: "The effect of cytokines on the ploidy of megakaryocytes." Int J Cell Cloning. 8. 245-252 (1990)

Teramura M，Mizoguchi H：“细胞因子对巨核细胞倍性的影响。”

Cynshi O,Satoh K,Higuchi M,Imai N,Kawaguchi T,Hirashima T: "Effects of recombinant human erythropoietin on anaemic W/W^v and SI/SI^d mice." Br J Haematol. 75. 319-324 (1990)

Cynshi O、Satoh K、Higuchi M、Imai N、Kawaguchi T、Hirashima T：“重组人促红细胞生成素对贫血 W/W^v 和 SI/SI^d 小鼠的影响。”

Nishi N,Nakahata T,Koike K,Takagi M,Naganuman K,Akabane T: "Induction of mixed erythroidーmegakaryocyte colonies and bipotential blast cell colonies by recombinant human erythropoietin in serumーfree culture." Blood. 76. 1330-1335 (1990)

Nishi N、Nakahata T、Koike K、Takagi M、Naganuman K、Akabane T：“在无血清培养物中通过重组人促红细胞生成素诱导混合红系巨核细胞集落和双能母细胞集落。” 1990）

Ema H,Suda t,Miura Y Nakauchi H: "Colony formation of cloneーsorted human hematopoietic progenitors." Blood. 75. 1941-1946 (1990)

Ema H、Suda t、Miura Y Nakauchi H：“克隆分选的人类造血祖细胞的集落形成。”75。1941-1946（1990）

Asano S,Okano A,Ozawa K,Nakahata T,Ishibashi T,Koike K,Kimura H,et al: "In vivo effects of recombinant human interleukinー6 in primates:Stimulated production of platelets." Blood. 75. 1602-1605 (1990)

Asano S、Okano A、Ozawa K、Nakahata T、Ishibashi T、Koike K、Kimura H 等：“重组人白细胞介素 6 对灵长类动物的体内作用：刺激血小板的产生。”75。1602-1605 (1990)