アンチセンスRNAの高発現系による染色体タンパク質の機能解析

利用反义RNA高表达系统进行染色体蛋白的功能分析

• 批准号: 02260201
• 负责人: 西森 克彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02260201/
• 关键词: アンチセンスRNA; ポジティブフィ-ドバック; マウス乳ガンウイルスLTR; ラミン; 染色体; 核; HeLa細胞; CEF細胞

ニワトリ6日胚より調製したCEF細胞にリン酸カルシウム法により,pMMcatとpMMGR(グルココルチコイドリセプタ-)を導入し,デクサメタゾンで誘導をかけたところ,誘導2日目の細胞抽出液はpRSVcatに匹敵する強い転写活性が観察された。またヒト由来HeLa細胞においてもpMMcatとpMMGRの同時導入によるポジティブフィ-ドバックがかかり,強いcat活性が見られることを確認した。次にK.Vorburgerらにより報告されたニワトリラミンB2cDNAの塩基配列をもとにPCR法によりCEF細胞より抽出した全RNA由来のcDNAから約1100bpのニワトリラミンB2cDNAN末側フラグメントを合成取得した。同様にD.Z.Fisherらにより報告されたヒトラミンA/CcDNAの塩基配列をもとにN末側約930bpのPCR産物を,HeLa細胞由来のtotalRNAより合成したcDNAより得た。これらのラミンcDNA断片は1目pUC118にクロ-ン化しMKohらにより作製されたMMTV・LTRを持つpMMEXに順向方,及び逆方向で括入しそれぞれpMMCLB2(トリラミンB2),pMMαCLB2(同アンチセンス),pMMhLA(ヒトラミンA),pMMαhLA(同アンチセンス)を得た。これらのプラスミドはリン酸カルシウム法によりpMMGR及ぴpSV2neoと共に細胞に導入し,マスカルチャ-としてデクサメタゾンによる誘導による細胞集団の変化を追跡している。又HeLa細胞に於して,まずpSV2neoとのcoーtransfectionによりpMMGR導入株を樹立し,これにpMMhLA,及びpMMαhLAをそれぞれpSV2hygとともにcoーtranfectionして,hLA,及びαーhLA(アンチヒトラミンA)RNAの高誘導株を取得する実験を現在行なっている。

CEF cells were induced by pMMcat and pMMGR(pMMGR), and cell extracts from CEF cells induced by pMMcat and pMMGR were observed to have high activity against pRSVcat. The results showed that pMMGR and pMCAT were introduced into HeLa cells simultaneously, and the activity of pMMGR and pMCAT was increased. The cDNA sequence of B2 cDNA was synthesized by PCR from CEF cells and extracted from the cDNA sequence of 1100bp. The same D.Z.Fisher reported that the DNA sequence of A/C cDNA was about 930bp in the N terminal, and the total RNA sequence of HeLa cells was obtained. The cDNA fragment pUC118 was obtained from pMMTV·LTR in the forward direction and in the reverse direction, including pMMCLB2 (pMMMEX B2),pMMα CLB2 (pMMα CLB2),pMMhLA(pMMα CLB2) and pMMαhLA(pMMα CLB2). The pMMGR and pSV2neo were introduced into the cell population and the cell population was traced. In addition, HeLa cells containing pSV2neo and co transfection were established, and pMMhLA, and pMMαhLA were obtained from highly inducible strains of pSV2hyg and co tranfection,hLA, and α hLA RNA.