GDF-9とc-kitリガンドのマウス卵巣卵胞の発達における機能の相互作用の研究
GDF-9与c-kit配体在小鼠卵泡发育中功能相互作用的研究
基本信息
- 批准号:09264202
- 负责人:
- 金额:$ 1.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
平成九年度GDF-9遺伝子欠損マウスでは卵胞が発達せず一時卵胞の段階で卵胞の発達が止まること、その卵巣mRNA中でc-kit ligand転写物が5倍程度に増加している現象が見られた。これに対し、growth factorの一種であるc-kit ligand遺伝子に欠陥があるSteel Pandaと呼ばれるmutantマウスで、GDF-9遺伝子欠損マウスと同様の卵胞発育不全が起きることが知られていたが、本研究の第一の目的はSteel Panda mutantマウスを入手し、その卵胞中でのGDF-9遺伝子の発現を観察し、発現に何らかの影響を受けていることを確認することであった。しかし、97年度中には所有者との交渉が前進せず、ミュータントマウスを入手でき図、研究が開始できなかった。幸い、近日中にsteel変異種を入手できる情勢となった。本研究のもう一つの目的は、単離したGDF-9蛋白を得て、そのレセプターを探索し、このGDF-9の情報伝達経路に関する知見を得ようというものである。筆者は、過去にCHO細胞での発現をマウスGDF-9遺伝子を用いて試みたが、プロテオリシスを受けていない単量体の前駆体産物が細胞膜、細胞質画分に発現していることは確認したものの、産物の培地中への分泌は確認できなかった。そこでTGF-βスーパーファミリィーに属するXenopusのVg-1のように、BMP2やアクチビンβBのプロシーケンスにつなぐことで分泌に成功した例にならい、マウスGDF-9及びヒトGDF-9cDNAをratBMP-2、及びヒトアクチビンβBcDNAの前駆体部分につないだコンストラクトを作成し、この発現ベクターをCV-1細胞、及び293細胞に導入したところ、細胞質中の蛋白に抗GDF-9ペプチド抗血清に反応する産物が見られ、またいくつかのクローンの培養培地上清中に微量ながらも抗血清に反応する物が存在している事を見いだした。検出系の改良など課題は多く残されているが、我々はこの結果よりヒト、及びマウス型の活性型GDF-9蛋白を得ることは十分可能と考えている。
In 2009, the expression of c-kit ligand in GDF-9 mRNA increased by 5 times. The first objective of this study was to investigate the development of a c-kit ligand gene, GDF-9 gene, and its effects on the development of the same type of egg. In the middle of the year, the owner's relationship was advanced, and the research began. Fortunately, the steel in the middle of the day began to change. The purpose of this study is to discover the GDF-9 protein and to explore the information pathway of GDF-9. In the past, we have tested the expression of GDF-9 gene in CHO cells and confirmed the secretion of GDF-9 gene in CHO cells. For example, GDF-9 and GDF-9 cDNAs are ratBMP-2 and GDF-9 cDNAs are ratBMP-2 and GDF-9 cDNAs are ratBMP-9 and GDF-9 cDNAs are ratBMP-2 cDNAs. Anti-GDF-9 antiserum products were found in cytosol proteins and in culture supernatants, and trace amounts of antiserum products were found in cytosol. The improvement of the detection system is very likely to result in the detection of active GDF-9 protein.
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
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