造血幹細胞で骨髄支持細胞間の細胞膜接着分子の精製と機能解析

造血干细胞与骨髓支持细胞间细胞膜粘附分子的纯化及功能分析

• 批准号: 03252201
• 负责人: 張ケ谷 健一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03252201/
• 关键词: steel factor; IL-11; インテグリン; 接着分子; CD44; 膜蛋白

ヒト骨髄支持細胞株のサイトカインの検討・KM‐104株よりmRNAを調整しcDNA合成キットによりcDNAを合成した。これをtemplateとし、human steel faotor(HSF)のsequenceよりprimerを作製し、PCR合成を行った。すると、760bp,670bp,490bpのHSFmRNAと思われるバンドが同定された。490bpのものは遊離型HSFに担当し、760bpのものは膜結合型HSFとかんがえられ、sequencingによりこれを確定した。KM‐102より採取したpoly(A)+RNA分画をIL‐11cDNA断片(420bp)をプロ-ブとしてNothern Blottingを行ったところ1.3kb,2.6kbの2種のmRNAが発現していた。2種のmRNAは同一蛋白をコ-ドすることを確かめており両者は3' 非翻訳領域の長さが異なる。支持細胞株の接着分子の検討:ヒト骨髄支持細胞株KMのインテグリンβ1サブユニット、CD44の発現がみられた。インテグリンβ2サブユニット、VLA‐4,VLA‐5,LFA‐1のα鎖,LAM‐1,P‐CAM,N‐CAM,V‐CAM等の発現はなかった。また,KM‐101を抗原として採取された抗体C‐F‐9のFabフラグメントは血液細胞株-支持細胞株間の接着を抑制することはすでに報告している。C‐F‐9の認識抗原は135kDの膜蛋白であり、この抗体を用いてKM‐101膜蛋白を免疫沈降すると165kDの蛋白が同時に沈降した。このことはC‐F‐9抗原は165kDの蛋白とヘテロダイマ-を形成していることを示唆し、この蛋白複合体はβメルカプトエタノ-ルを添加して環元、SDS PAGEにて電気泳動すると、145kDの比較的幅の広い単一バンドを形成した。この構造,挙動はインテグリンβ鎖に類似している。現在、この蛋白の精製を行っている。

The expression of mRNA in KM-104 cells was regulated and cDNA was synthesized. The template, human steel faotor(HSF) sequence, primer and PCR synthesis were performed. HSF mRNA of 760bp,670bp and 490bp were identified. 490bp and 760bp and 760bp and 790 bp and 760bp and 760 bp KM-102 was isolated from poly(A)+RNA by PCR and two kinds of mRNA (1.3kb, 2.6kb) were detected from IL-11cDNA fragment (420bp). Two kinds of mRNA are different from each other in the same protein domain. The expression of CD44 and β1 in KM cells was studied. Beta 2, VLA‐4,VLA‐5,LFA‐1,LAM‐1,P‐CAM,N‐CAM,V‐CAM, etc. The KM-101 antigen was used to inhibit the subsequent inhibition of C-F-9 Fab between blood cell lines and Sertoli cell lines. C‐F‐9 recognition antigen is a 135kD membrane protein, and the antibody is used to immunize KM‐101 membrane protein. The C-F-9 antigen was formed from a protein complex of 165kD by addition of a ring element, SDS PAGE, and a comparative protein complex of 145kD. The structure of this kind of structure is similar to that of the β lock. Now, this protein is refined.

项目成果

Umezawa A,Tachibana K,Harigaya K,Kusakari K et al.: "Colonyーstimulating factor 1 express is down ーregulated during adipocyte differentiation of H-1/A marrow stromal cells and induced by cachectin/tamor necrosis factor" Mol Cel Biol. 11. 920-927 (1991)

Umezawa A、Tachibana K、Harigaya K、Kusakari K 等人：“集落刺激因子 1 表达在 H-1/A 骨髓基质细胞的脂肪细胞分化过程中下调，并由恶病质素/tamor 坏死因子诱导”Mol Cel Biol 11. 920-927 (1991)

Harigaya,k.(Eds kobayashi.et al): "Bone marrow cells and hemafopoiesis.Childhood Lcukcmia,Present Proflems and Futare Prospects" Kluwer Acad Publ,Boston, 33-41(265) (1991)

Harigaya,k.(Eds kobayashi.et al)：“骨髓细胞和造血作用。儿童白血病、当前的Prolems 和 Futare 前景”Kluwer Acad Publ，波士顿，33-41(265) (1991)