造血幹細胞で骨髄支持細胞間の細胞膜接着分子の精製と機能解析

ヒト骨髄支持細胞株のサイトカインの検討・KM‐104株よりmRNAを調整しcDNA合成キットによりcDNAを合成した。これをtemplateとし、human steel faotor(HSF)のsequenceよりprimerを作製し、PCR合成を行った。すると、760bp,670bp,490bpのHSFmRNAと思われるバンドが同定された。490bpのものは遊離型HSFに担当し、760bpのものは膜結合型HSFとかんがえられ、sequencingによりこれを確定した。KM‐102より採取したpoly(A)+RNA分画をIL‐11cDNA断片(420bp)をプロ-ブとしてNothern Blottingを行ったところ1.3kb,2.6kbの2種のmRNAが発現していた。2種のmRNAは同一蛋白をコ-ドすることを確かめており両者は3' 非翻訳領域の長さが異なる。支持細胞株の接着分子の検討:ヒト骨髄支持細胞株KMのインテグリンβ1サブユニット、CD44の発現がみられた。インテグリンβ2サブユニット、VLA‐4,VLA‐5,LFA‐1のα鎖,LAM‐1,P‐CAM,N‐CAM,V‐CAM等の発現はなかった。また,KM‐101を抗原として採取された抗体C‐F‐9のFabフラグメントは血液細胞株-支持細胞株間の接着を抑制することはすでに報告している。C‐F‐9の認識抗原は135kDの膜蛋白であり、この抗体を用いてKM‐101膜蛋白を免疫沈降すると165kDの蛋白が同時に沈降した。このことはC‐F‐9抗原は165kDの蛋白とヘテロダイマ-を形成していることを示唆し、この蛋白複合体はβメルカプトエタノ-ルを添加して環元、SDS PAGEにて電気泳動すると、145kDの比較的幅の広い単一バンドを形成した。この構造,挙動はインテグリンβ鎖に類似している。現在、この蛋白の精製を行っている。

ヒト骨髄支持細胞株のサイトカインの検討・KM‐104株よりmRNAを調整しcDNA合成キットによりcDNAを合成した。これをtemplateとし、human steel faotor(HSF)のsequenceよりprimerを作製し、PCR合成を行った。すると、760bp,670bp,490bpのHSFmRNAと思われるバンドが同定された。490bpのものは遊離型HSFに担当し、760bpのものは膜結合型HSFとかんがえられ、sequencingによりこれを確定した。KM‐102より採取したpoly(A)+RNA分画をIL‐11cDNA断片(420bp)をプロ-ブとしてNothern Blottingを行ったところ1.3kb,2.6kbの2種のmRNAが発現していた。2種のmRNAは同一蛋白をコ-ドすることを確かめており両者は3' 非翻訳領域の長さが異なる。支持細胞株の接着分子の検討:ヒト骨髄支持細胞株KMのインテグリンβ1サブユニット、CD44の発現がみられた。インテグリンβ2サブユニット、VLA‐4,VLA‐5,LFA‐1のα鎖,LAM‐1,P‐CAM,N‐CAM,V‐CAM等の発現はなかった。また,KM‐101を抗原として採取された抗体C‐F‐9のFabフラグメントは血液細胞株-支持細胞株間の接着を抑制することはすでに報告している。C‐F‐9の認識抗原は135kDの膜蛋白であり、この抗体を用いてKM‐101膜蛋白を免疫沈降すると165kDの蛋白が同時に沈降した。このことはC‐F‐9抗原は165kDの蛋白とヘテロダイマ-を形成していることを示唆し、この蛋白複合体はβメルカプトエタノ-ルを添加して環元、SDS PAGEにて電気泳動すると、145kDの比較的幅の広い単一バンドを形成した。この構造,挙動はインテグリンβ鎖に類似している。現在、この蛋白の精製を行っている。