修飾ヌクレオチドによる生体環境場における情報伝達系の光制御

使用修饰核苷酸对生物环境中的信息转导系统进行光学控制

• 批准号: 06239111
• 负责人: 佐々木 政子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06239111/
• 关键词: 修飾ヌクレオチド; 光駆動型薬剤; リポソーム; αーターチエニル; リソソーム; エンドサイトーシス

本研究は遺伝子DNAあるいは外来遺伝子に起因する病気の発現を、光化学反応を利用して異常遺伝子を確実にブッロックすることを狙った光化学的遺伝子発現抑制法の開発のための基礎研究である。本年度は、光駆動型薬剤として光駆動部位を付加したオリゴヌクレオチド(F-DNA)を合成し、反応場となる細胞への導入手法と細胞内移行プロセスを検討し、次の結果を得た。1)調製リポソームは直径約100nmの多層膜である。リポソームに包埋されたF-DNAの漏出率は2%/h(37℃)で、リポソームの安定性は良好と判明した。2)F-DNA/リポソームの蛍光は細胞内のリソソーム様小器官と核小体から検出され、F-DNAは細胞内のこれらの部位に親和することを明らかにした。核小体内に観測されるF-DNAの蛍光は時間と共に指数関数的に減少した。この蛍光の減少は、F-DNAの蛍光がF-DNAの水溶液中では励起に対して極めて安定なことから、F-DNAが核小体内に存在する一本鎖DNAかrRNAに光結合したためと考察した。3)αーターチエニル標識リポソームの蛍光はリソソーム様小器官から検出されたが、細胞膜からは検出されなかった。このことはリポソームの細胞内移行過程がエンドサイトーシスによることを強く示唆した。4)無蛍光基質フルオレセイン-(β-D-ガラクトピラノシド)(略 FDG)はリソソームマーカー酵素β-ガラクトシダーゼ(略 β-gal)活性により蛍光物質フルオレセインを生成する。F-DNAの細胞内移行過程がリソソームを経由するかどうかを明らかにするため、FDG包埋リポソームを調製し細胞内の親和部位の蛍光観察を行った。フルオレセインの蛍光はリソソームと核小体から検出され、F-DNA/リポソームの細胞内の蛍光分布と一致した。フルオレセインの蛍光が核小体内に観測されたことから、F-DNA/リポソームはリソソーム内で多層膜リポソームの崩壊過程をへて核小体へ移行したと考察した。

This study traces of は 伝 child DNA あ る い は foreign heritage 伝 son に cause す る disease 気 の 発 を now, photochemical 応 を using し て abnormal heritage 伝 を son really be に ブ ッ ロ ッ ク す る こ と を previously っ た photochemical heritage 伝 son 発 inhibition method の now open 発 の た め の basic research で あ る. This year は type, light 駆 薬 tonic と し て 駆 light moving parts を pay add し た オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド (F) - DNA synthetic し を, anti 応 と な る cells へ の import technique と cells migration プ ロ セ ス を beg し 検 の results, time を た. 1) Modulate a リポソ, ム, ム <s:1> multilayer film with a diameter of approximately 100nm である. リ ポ ソ ー ム に embedding さ れ た F - DNA の は leakage rate 2% / h (37 ℃) で, リ ポ ソ ー ム の stability good は と.at し た. 2) F - DNA / リ ポ ソ ー ム の 蛍 light は intracellular の リ ソ ソ ー ム others in small organ と nucleosome か ら 検 out さ れ, F - DNA は intracellular の こ れ ら の parts に affinity す る こ と を Ming ら か に し た. In the nucleosomes, に観 measurement of されるF-DNA <s:1> 蛍 light <s:1> time と co-に index number に reduction た た. こ の 蛍 light の reduce は, F - DNA の 蛍 の light が F - DNA in aqueous solution, で は wound up に し seaborne て extremely め て settle な こ と か ら nuclear small に exists in the body, the F - DNA が す る a lock DNA か rRNA に light combining し た た め と investigation し た. 3) alpha ー タ ー チ エ ニ ル logo リ ポ ソ ー ム の 蛍 light は リ ソ ソ ー ム others in small organ か ら 検 out さ れ た が, cell membrane か ら は 検 out さ れ な か っ た. こ の こ と は リ ポ ソ ー ム の cell migration process が エ ン ド サ イ ト ー シ ス に よ る こ と を く and shown strong sucking し た. 4) no 蛍 light matrix フ ル オ レ セ イ ン - (beta - D - ガ ラ ク ト ピ ラ ノ シ ド) (FDG) slightly は リ ソ ソ ー ム マ ー カ ー enzyme beta ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ (slightly beta gal) active に よ り 蛍 light material フ ル オ レ セ イ ン を generated す る. F - DNA の cell migration process が リ ソ ソ ー ム を 経 by す る か ど う か を Ming ら か に す る た め, FDG embedding リ ポ ソ ー ム を の し cell affinity modulation part の 蛍 light line 観 examine を っ た. フ ル オ レ セ イ ン の 蛍 light は リ ソ ソ ー ム と nucleosome か ら 検 out さ れ, F - DNA / リ ポ ソ ー ム の intracellular の 蛍 light distribution と consistent し た. フ ル オ レ セ イ ン の 蛍 が nuclear small light body に 観 measuring さ れ た こ と か ら, F - DNA / リ ポ ソ ー ム は リ ソ ソ ー ム で in multilayer リ ポ ソ ー ム の collapse 壊 process を へ て nucleosome へ transitional し た と investigation し た.

项目成果

佐々木 政子: "最近の光環境の変化" Journal of Japanese Society of Hospital Pharmacists. 30. 5-18 (1994)

佐佐木雅子：“光环境的最新变化”日本医院药剂师学会杂志 30. 5-18 (1994)。

M.Sasaki et al.: "An Increase in the Global Solar Ultraviolet-B Irradiance at 35N in Japan since 1990." Journal of Geomagnetism and Geoelectricity. 46. 827-834 (1994)

M.Sasaki 等人：“自 1990 年以来，日本 35N 的全球太阳紫外线 B 辐照度有所增加。”

M.Watanabe and M.Sasaki et al.,: "Introduction of fluorescein-labeled oligonucleotides into cultured human keratinocytes and detection of thier affinity---" Photomedicine and Photobiology. 16. in press (1994)

M.Watanabe 和 M.Sasaki 等人，：“将荧光素标记的寡核苷酸引入培养的人角质形成细胞并检测其亲和力——”光医学和光生物学。

H.Fujita,T.Kumamoto and M.Sasaki: "Photochemical and photobiological properties of a newly synthesized hydrophilic derivative of terthiophene." Photomedicine and Photobiology. 16(in press). (1994)

H.Fujita、T.Kumamoto 和 M.Sasaki：“新合成的三噻吩亲水衍生物的光化学和光生物学特性。”

M.Kobayashi and M.Sasaki et al.,: "Photocleavage of DNA by Chlorophyll-and Porpyrin-Derivatives." Photomedicine and Photobiology. 16(in press). (1994)

M.Kobayashi 和 M.Sasaki 等人：“叶绿素和卟啉衍生物对 DNA 进行光裂解。”