超高感度HPLC/レーザー蛍光法による中枢シナプスの逆行性情報伝達物質の検索

使用超高灵敏度 HPLC/激光荧光法寻找中央突触中的逆行信息传递器

• 批准号: 06253202
• 负责人: 澤田 嗣郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06253202/
• 关键词: 高速液体クロマトグラフィー; レーザー; レーザー蛍光法; プロスタグランジン; アラキドン酸

シナプスでの逆行性する情報伝達物質としてアラキドン酸とその代謝物が想定されている。これを証明するには、アラキドン酸と代謝物の存在、放出、作用を確認する必要がある。しかし、シナプスのような微小且つ微量しか得られないサンプルでは、感度の点から従来の分析法では困難が予測される。我々は、レーザー励起蛍光法(LIF)とHPLCを組合わせたHPLC/LIFを開発し、100amolレベルの分離検出に成功し、RIAに比較して1〜2桁程度高感度な分析法を開発した。本研究ではHPLC/LIFによりこれらの物質群を高感度にしかも多種類同時に分析し、アラキドン酸などが存在することを分析化学的に確かめることを目的とした。このために分析ソフトとして微小且つ微量しか得られない神経細胞に適した前処理法を開発した。以下に成果の概要を述べる。(1) 代謝物のプロスタグランジンについては、前年度までに見出した、ADAM(蛍光標識剤)化すると分子内水素結合のためと思われる特異な分離挙動を利用して、逆相分取、順相分析の分析手順を考察し、より精度の高い分離を可能にした。その結果、超感度検出でもバックグラウンドは安定し、経口投与のプロスタグランジン製剤から血清への移行をpg/mlのレベルで検出できた。(2) アラキドン酸の分離条件を(1)を基本に特定した。ADAM化した脂肪酸の極性は低く順相での不純物分離が難しくなるが、先の分子内水素結合性の挙動を利用し、精密分離できるメタノール:水の混合比を特定できた。(3) 以上の方法をもとに、アラキドン酸をサブ-ng/mlレベルで分析できる見通しを得た。分析条件を特定する根拠を得たので、今後、強極性のグルタミン酸に対する分析条件を同様に特定する予定である。

The information on the retroactivity of the substance and the metabolites of the acid are determined. It is necessary to prove the existence, release and function of acid metabolites. It is difficult to predict the sensitivity of the analytical method. A combination of HPLC/LIF, HPLC/LIF, and RIA was developed for the separation and determination of 100-mmol/L and for comparison with 1 - 2-D high sensitivity analytical methods. The purpose of this study is to analyze the presence of multiple species of substances in HPLC/LIF. This analysis is very small and very small, and the pre-treatment method is developed. A summary of the results is described below. (1)Metabolite separation and analysis methods were investigated in the past year, and ADAM(fluorescent marker) analysis was used to determine the specific separation and separation of metabolites. The results, hypersensitivity detection, stability detection, and serum migration detection were all recorded. (2)The separation conditions of acid in the sample are as follows: ADAM fatty acid polarity is low, phase separation of impurities is difficult, prior to the use of molecular water binding mobility, precision separation of water mixing ratio is specific (3)The above methods are used to analyze the contents of the sample. The analytical conditions are specified for the purpose of determining whether the analysis is conducted in the future or not.