細胞増殖関連抗原gp125隣接分子の遺伝子クローニング、抗体作製と抗体結合の増強

细胞增殖相关抗原gp125邻近分子的基因克隆、抗体产生和抗体结合增强

• 批准号: 06282204
• 负责人: 益子 高
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06282204/
• 关键词: 細胞増殖関連抗原; モノクローナル抗体; 遺伝子クローニング

1.gp125遺伝子センストランスフェクタントを用いた解析:NIH-3T3細胞にラットgp125-HC遺伝子を導入したトランスフェクタントを樹立し、gp125蛋白の発現量と細胞増殖、アミノ酸取り込み能との間に、正の相関を見いだした。2.gp125遺伝子アンチセンストランスフェクタントを用いた解析:デキサメサゾンにて誘導的にアンチセンス鎖を発現するトランスフェクタントを樹立し、gp125蛋白の発現を抑制した結果、細胞増殖とアミノ酸取り込みが阻害された。3.gp125-HCに対するモノクローナル抗体:標識抗gp125-HC抗体を用いたサンドイッチELISA系にてハイブリドーマをスクリーニングし、2種類の抗体を得た。このうちの1種はヒトとラットの共通エピトープを認識し、また、従来困難だったウェスタンブロットによるgp125-HCの検出を可能とした。4.gp125-LCに対するモノクローナル抗体:アフィニティー精製ラットgp125-LCをマウスに免疫し、gp125-LCの分子量40kDaをウェスタンブロットにて検出し得る数種類のモノクローナル抗体を作製した。免疫組織学的検索の結果、gp125-LCの組織分布はgp125-HCと類似していたが、完全には一致しなかった。5.抗gp125-HC抗体の化学修飾:ヒトとラットのgp125-HCを各々認識するモノクローナル抗体をポリシステインとβアラニンにて酸性に化学修飾した結果、プラスチックプレート等に対する抗体の非特異結合が減少した。

1. Analysis of gp125 protein expression:NIH-3T3 cells were transfected with gp125-HC protein, and the expression of gp125 protein was correlated with cell proliferation, cell growth, and cell viability. 2. Analysis of gp125 protein expression: Gp125 protein expression was inhibited by Gp125 protein expression, cell proliferation was inhibited by Gp125 protein expression, and cell proliferation was inhibited by Gp125 protein expression. 3. gp125-HC antibody: identification of anti-gp125-HC antibody in the middle of the ELISA system, 2 kinds of antibodies were obtained. A common problem is that it is difficult to identify and identify the problem with gp125-HC. 4. gp125-LC antibody: gp125-LC molecular weight 40kDa, gp125 Immunohistochemical results showed that the tissue distribution of gp125-LC was similar to that of gp125-HC. 5. Chemical modification of anti-gp125-HC antibody: The chemical modification of gp125-HC antibody in different regions reduces the non-specific binding of antibody.