細胞増殖関連抗原gp125の遺伝子、機能解析と制癌への応用

细胞增殖相关抗原gp125基因及功能分析及其在癌症控制中的应用

• 批准号: 05152010
• 负责人: 益子 高
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152010/
• 关键词: 細胞増殖関連抗原; 遺伝子クローニング; モノクローナル抗体

1.細胞増殖関連抗原gp125-HC蛋白のマイクロシーケンス:ラット肝癌細胞より抗gp125モノクローナル抗体のアフィニテイーカラムにて精製した蛋白をマイクロシーケンスした結果、ヒト及びマウスの4F2抗原のラット相同蛋白であることが示唆された。2.細胞増殖関連抗原gp125-HCの遺伝子クローニング:マイクロシーケンスにて決定されたアミノ酸配列に基ずいてDNAプライマーを合成、PCRにてラットgp125の全塩基配列を解読した結果、4F2抗原同様、C末端を細胞表面に露出した二型糖蛋白であることが判明した。3.gp125ペプチドに対する抗体作成:クローン化したgp125遺伝子のアミノ酸配列に基ずき、細胞外の親水性領域ペプチド配列を認識するモノクローナル抗体を作成、Western blotにてgp125-HCの分子量85kDaを検出し得た。4.gp125トランスフェクタント:クローン化した遺伝子導入トランスフェクタントを作成、抗gp125-HC抗体と反応することを確認した。また、抗gp125-HC抗体でトランスフェクタントを処理した際の、細胞内アミノ酸取込み阻害を見いだした。5.アンチセンスDNA:gp125-HC遺伝子の様々の領域に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドが癌細胞のDNA合成を阻害することを確認した。6.抗体の化学修飾:抗gp125-HCモノクローナル抗体を化学修飾することで、免疫沈降法及びパラフィン切片の免疫組織染色における抗体の結合力が増強された。

1. Cell proliferation-associated antigen gp125-HC protein: The results of refining the protein from the anti-gp125-HC antibody in Rakuta liver cancer cells show that the same protein from the 4F2 antigen of Rakuta and Taitung is present. 2. Cell growth-related antigen gp125-HC gene sequence analysis: DNA synthesis, PCR analysis, 4F2 antigen identity, C-terminal exposure to type II glycoprotein on cell surface 3. Preparation of gp125-HC Antibody: Preparation of gp125-HC Antibody with Molecular Weight of 85kDa by Western Blot 4. gp125-HC antibody preparation and anti-gp125-HC antibody confirmation. Anti-gp125-HC antibodies can be used to treat intracellular cancer. 5. Identification of DNA: gp125-HC Gene Inhibiting DNA Synthesis in Cancer Cells 6. Chemical modification of antibody: chemical modification of anti-gp125-HC antibody, immunosedimentation method and immunohistochemical staining of anti-gp125-HC antibody increased binding capacity of antibody.

项目成果

Masuko,T.,et al.: "Efficient immunostaining of tissue sections with chemically modified monoclonal antibodies." J.Immunol.Methods. 165. 67-73 (1993)

Masuko,T.,et al.：“使用化学修饰的单克隆抗体对组织切片进行有效的免疫染色。”

Ueno,H.,et al.: "Enhanced binding to antigen of monoclonal antibody with a crosslinker." Biochem.Biophys.Res.Commun.191. 701-708 (1993)

Ueno,H.,et al.：“用交联剂增强单克隆抗体与抗原的结合。”

Kinosaki,M.,et al.: "Intracellular localization of UDP-glucuronyltransferase expressed from the transfected cDNA in cultured cells." Cell Structure and Function. 18. 41-51 (1993)

Kinosaki,M.,et al.：“培养细胞中转染的 cDNA 表达的 UDP-葡萄糖醛酸转移酶的细胞内定位。”