ストレスに応答して活性化するキナーゼ群の解析

分析应激反应中激活的激酶

• 批准号: 07253212
• 负责人: 後藤 由季子
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07253212/
• 关键词: ストレス刺激; JNK; SAPK; SEKI; XMEK2; MEKK; キナーゼカスケード

1)JNK/SAPKを活性化するキナーゼの候補として、MAPKKホモログのXMEK2(Xenopus由来)があったので、XMEK2を大腸菌に発現、精製し、JNK/SAPKを基質にするかを検討した。XMEK2は、JNK/SAPKを効率良くリン酸化し、活性化した。一方、XMEK2は、MAPKを全く基質にしなかった。2)MAPKKキナーゼのひとつMEKKが、XMEK2を活性化できることを見い出した。従って、少なくともin vitroでは、MEKK-XMEK2-JNK/SAPKというカスケードが動くことが示された。3)高張刺激した細胞の抽出液からJNK/SAPK活性化活性の精製を試みた。Q-sepharoseカラムにおいて、未吸着画分にほとんどの活性が溶出し、吸着画分に少量の活性が溶出した。ブロッティングの結果から、吸着画分の活性がSEK1に対応していることが明らかになった。従って、高張刺激によって活性化する、主なJNK/SAPK活性化因子は、未知のキナーゼであることが示唆された。現在このキナーゼを精製中である。4) JNK/SAPKの活性化がRasに依存しているか否かを、dominant negative Rasを用いて検討した。高張刺激、熱ショック、亜ヒ素酸(化学的ストレス)によるJNK/SAPKの活性化はRasに依存していなかったが、タンパク質合成阻害剤によるJNK/SAPKの活性化は、Rasに依存していた。5) UV刺激により、JNK/SAPKの一部が核移行することを見い出した。

1)JNK/SAPK is activated, XMEK2(Xenopus origin) is activated, XMEK2 is produced, purified, JNK/SAPK is substrate is investigated. XMEK/SAPK is very active. One side, XMEK2, MAPK all matrix 2)MAPKK, XMEK2 and MEK3 are activated. MEK-XMEK2-JNK/SAPK 3)The extract of hypertonic stimulation cells was purified by JNK/SAPK activation. Q-sepharose, unadsorbed, active, dissolved, adsorbed, active, dissolved The activity of the adsorption component is determined by SEK1. The activation of JNK/SAPK is unknown. Now we have to go through the process. 4)JNK/SAPK activation is dependent on Ras and dominant-negative Ras. The activation of JNK/SAPK depends on hypertonic stimuli, thermal stress, and nitric acid (chemical stress). 5)UV stimulation, JNK/SAPK and some other nuclear migration.

项目成果

Gotoh, Y.: "Initiation of Xenopus oocyte maturation by activation of the mitogen-activated protein kinase cascade." J. Biol. Chem.270. 25898-25904 (1995)

Gotoh, Y.：“通过激活丝裂原激活的蛋白激酶级联来启动爪蟾卵母细胞成熟。”

Matsuda, S.: "Activation of protein kinase cascades by osmotic shock." J. Biol. Chem.270. 12781-12786 (1995)

Matsuda, S.：“渗透压休克激活蛋白激酶级联。”

Moriguchi, T.: "Evidence for multiple activators for stress-activated protein kinases/c-Jun amino-terminal kinases. Existence of novel activators." J. Biol. Chem.270. 12969-12972 (1995)

Moriguchi, T.：“应激激活蛋白激酶/c-Jun 氨基末端激酶的多种激活剂的证据。新型激活剂的存在。”

Gotoh, Y.: "Involvement of the MAP kinase cascade in Xenopus mesoderm induction." EMBO J.14. 2491-2498 (1995)

Gotoh, Y.：“MAP 激酶级联参与非洲爪蟾中胚层诱导。”

Fukuda, M.: "Induction of neurite outgrowth by MAP kinase in PC12 cells." Oncogene. 11. 239-244 (1995)

Fukuda, M.：“MAP 激酶在 PC12 细胞中诱导神经突生长。”