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標的遺伝子組換え法による受精の分子機構に関する研究

利用靶向基因重组方法研究受精的分子机制

基本信息

批准号：
07260202
负责人：
馬場忠
金额：
$ 2.18万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

精子に局在するトリプシン様セリンプロテ-ゼアクロシンは,受精の際に卵透明帯を溶解して精子の卵への侵入を容易にさせるものと考えられてきた。標的遺伝子組換え法を用いてアクロシンを欠損するモデル変異マウスを作製・解析した結果,その変異マウスは野性種と同等の自然交配能を有していることが判明した。しかし,このアクロシン欠損マウス精子を用いて生体外受精試験を行うと,野性種のものよりも卵透明帯への精子の侵入にわずかな遅延が認められた。また,アクロシン以外の新規セリン系プロテ-ゼ(カッパイン)が精子に存在すること,さらにアクロシンがカッパインの活性化を促進させていることなどが明らかとなった。このマウスカッパインの構造と受精での機能・役割を明確にする目的で,カッパインをコードするcDNAと染色体遺伝子クローンの単離と解析を行った。マウスカッパインは367アミノ酸残基より成る前駆体として合成され,36残基の軽鎖と300残基の重鎖がひとつのジスルフィド結合により連結されているような成熟型酵素にプロセシングされることが明らかとなった。ほかのセリンプロテアーゼとの一次構造の比較から,カッパインがトリプシンやアクロシンとは異なる基質の特異性を有していることも示唆された。また,マウスカッパイン遺伝子は,全長約5キロ塩基対であり,5個のエクソンより構成されていた。サザンブロット分析の結果,この遺伝子がマウス染色体上でシングルコピーとして存在することも明確となった。カッパイン遺伝子は精巣特異的に発現しており,精子形成過程ではアクロシンやほかのアクロソームタンパク質遺伝子と同様にパキテン期精母細胞ですでに転写が開始しており,半数体精細胞でその発現が最も盛んであった。このカッパイン生体内機能解析のために,ターゲティングベクターを構築してES細胞経由で遺伝子相同組換えを試みたが,満足のいく結果が得られなかった。現在,ターゲティングベクターを再構築して,目的のES細胞クローンを単離することを試みている。

Sperm is affected by sperm. This is because the zona pellucida dissolves during fertilization, making it easy for sperm to invade the egg. The results of the analysis of the target subspecies showed that there was no difference between the wild species and the natural mating ability. In vitro fertilization (IVF) tests were carried out for wild species, and the sperm invasion was delayed. In addition, the new regulation of sperm other than sperm is to promote the activation of sperm. The structure and function of the chromosome are analyzed. The 367-residue acid sequence was synthesized as a precursor, and the 36-residue sequence was re-linked to the 300-residue sequence. A comparison of the primary structure of the matrix and the specificity of the matrix. It is composed of 5 parts, each of which has a total length of about 5 parts. The results of this analysis show that there is a clear difference between the number of chromosomes and the number of chromosomes. Spermatogenesis begins with the development of spermatozoa, which is unique to spermatogenesis. Spermatogenesis begins with the development of spermatozoa, and half of spermatozoa are developed. In vivo functional analysis of ES cells, the results were obtained from the same component of ES cells Now, try to reconstruct the target ES cell.