血液細胞の増殖・分化における転写因子E2Fの役割の解析および臨床応用

转录因子E2F在血细胞增殖分化中的作用分析及临床应用

• 批准号: 07269220
• 负责人: 古川 雄祐
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07269220/
• 关键词: インターフェロン; 転写因子; E2F; E2F-1; RB; cdc2; プロモーター; 細胞周期

Interferon-α (IFN)感受性のB細胞性白血病細胞株Daudiを用い、IFNによる血液細胞の増殖抑制における転写因子E2Fの役割につき検討した。[結果](1)INF-α 100IU/ml存在下でDaudi細胞株を培養すると、細胞増殖は約24時間後に対照の約20%に抑制された。(2)E2Fのmajor subunitであるE2F-1のmRNA発現は、IFN処理後約8時間より低下した。一方、もう一つのsubunitであるDP-1の発現はほとんど影響を受けなかった。(3)E2F-1のdenovo蛋白合成は、約12時間後より有意に低下した。その結果、E2FのDNA結合活性も減少した。(4)IFN処理24時間後でも、RB遺伝子産物と結合したE2Fはほぼ処理前と変わらずに残存しており、これはIFNによるRBの脱リン酸化に伴うE2F結合の増加によるものと考えられた。脱リン酸化型RBと結合したE2Fは、本来の機能とは逆に転写因子として働くことが知られており、IFN処理後24時間でみられるE2Fは、細胞増殖に関してはnegativeに機能していると推定された。(5)E2F結合によりその活性が調節されるcdc2遺伝子のプロモーターをreporterとして用い、IFNにより実際にin vivoでE2F活性が抑制されるかどうかを調べた。Daudi細胞にelectroporationにてcdc2プロモーターを導入後、IFNを加えて24時間培養し、プロモーター活性の変動をCATアッセイにより測定すると、IFNにより有意に抑制されることがわかった。(6)CMVプロモーターを用いてDaudi細胞にE2F-1を強発現させると、IFNによる増殖抑制効果が減弱した。[結語]以上の結果より、IFNによる血液細胞の増殖抑制にはE2F-1mRNAの早期からの発現抑制によるE2F活性の低下が重要な役割を果たしていることがわかった。この知見は、IFNのより有効な臨床応用、耐性の克服、副作用の防止などに役立つ可能性がある。

Interferon-α (IFN)-responsive B-cell leukemia cell line Daudi, IFN-induced inhibition of proliferation of blood cells, and expression of factor E2F [Results](1) In the presence of INF-α 100IU/ml, Daudi cell line was cultured for about 24 hours, and the inhibition rate was about 20% compared with the control group. (2) mRNA expression of E2F-1 decreased after IFN treatment. One side, two subunits, DP-1 and the emergence of the opposite, affected by the impact (3) E2F-1 denovo protein synthesis decreased after about 12 hours. As a result, the DNA binding activity of E2F decreased. (4) After 24 hours of IFN treatment, RB gene products were bound to E2F before IFN treatment. E2F is related to cell proliferation 24 hours after IFN treatment. (5) E2F binding activity is regulated by cdc2 gene reporter and IFN in vivo. Daudi cells were cultured for 24 hours after the introduction of cdc2 and IFN, and the activity of cdc2 and IFN was intentionally inhibited. (6) The inhibition effect of CMV on proliferation of Daudi cells by IFN-1 and E2F-1 was reduced. [Conclusion] The above results show that IFN inhibits the proliferation of blood cells, inhibits the early development of E2F-1mRNA, and reduces the activity of E2F. This knowledge, IFN, has the potential for clinical use, tolerance, and prevention of side effects.

项目成果

Terui、 Y.、 Furuya、 Y. et al.: "Apoptosis during HL-60 Cell Differentiation Is Closely Related to a G0/G1 Cell Cycle Arrest." J. Cell. Physiol.164. 74-84 (1995)

Terui, Y., Furuya, Y. 等人：“HL-60 细胞分化过程中的细胞凋亡与 G0/G1 细胞周期停滞密切相关。”J. Cell. 74-84。

Terui、 Y.、 Furuya、 Y. et al.: "Up-Regulation of VLA-5 Expression during Monocytic Differentiation and its Role in Negative Control of the Survival of Peripheral Blood Monocytes." J. Imunol.156 3月号予定. (1996)

Terui, Y., Furuya, Y. 等人：“单核细胞分化过程中 VLA-5 表达的上调及其在外周血单核细胞存活的负控制中的作用”。J. Imunol.156 3 月号。 1996）

古川雄祐: "癌細胞の分化誘導とアポトーシス" 穂積本男・斉藤政樹・佐藤光信編, (1995)

Yusuke Furukawa：“癌细胞分化和凋亡的诱导”，由 Motoo Hozumi、Masaki Saito 和 Mitsunobu Sato 编辑，(1995)

Furuya、 Y. et al.: "Preferential Production of Interleukin-1β over Interleukin-1 Receptor Antagonist Contributes to Proliferation and Suppression of Apoptosis in Leukemic Cells." Jpn. J. Cancer Res.86. 208-216 (1995)

Furuya, Y. 等人：“相对于白细胞介素 1 受体拮抗剂，白细胞介素 1β 的优先产生有助于白血病细胞的增殖和细胞凋亡”，J. Cancer Res.86 (1995)。

Takahashi、 M. et al.: "Human Monocyte-Endotherial Cell Interaction Induces Synthesis of Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor." Circulation. (印刷中). (1996)

Takahashi, M. 等人：“人类单核细胞-内皮细胞相互作用诱导粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的合成”（出版中）。