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遺伝子マーカーを用いた自家骨髄移植後の造血・免疫能再構築と再発起源細胞の解析

利用遗传标记分析自体骨髓移植后造血和免疫重建及复发源细胞

基本信息

批准号：
07274226
负责人：
岸賢治
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

自家骨髄移植後の造血免疫能の再構築さらに腫瘍再発の起源細胞の解析を目的とし、移植細胞への遺伝子マ-キングを実施するための基礎検討を行った。正常ヒト骨髄よpannning法によりCD34陽性細胞を純化し、造血因子存在下に24-48時間液体培養した。Neo耐性遺伝子を含むレトロウイルスベクター培養上清を加え培養し、さらに導入効率を求めた。CD34細胞への遺伝子導入は造血因子存在下にベクターに暴露して24時間より増加し、上清との共培養時に遠心を加えることにより増強された。CFU-GMへの遺伝子導入は48時間の造血因子培養後ベクター上清とともに遠心後、48時間の培養が最適で導入効率は5.1-35.0%であった。単純ヘルペスウイルスのHSV-TK遺伝子導入細胞に対するGCVによる殺細胞効果を利用した遺伝子治療につき基礎検討を行った。GCVはHSV-TKによりリン酸化され、DNA合成阻害活性を示し、遺伝子導入癌細胞を障害する。HSV-TK遺伝子導入細胞(TK-K562)のGCVに対する感受性は、臨床投与時における最高血中濃度の1/10程度ですべて死滅した。一方、対象の非導入細胞では、GCVに抵抗性であった。遺伝子非導入K562とTK-K562の混在時のGCV処理は、TK-K562のみでなくK562に対する細胞障害を示し、いわゆるbistander効果を認めた。この効果は、軟寒天内の細胞非接触状態でも観察されたが、液体培養による細胞接触がより効果的で、cell to cell interactionが想定された。TK遺伝子導入とGCV処理による殺細胞作用のbistander効果を利用した自家移植の際に必要なpurging法として有用と思われるが、遺伝子マ-キング法による自家移植の有効性判定が必要とされる。

Objective: To study the reconstruction of hematopoietic immune function after autologous bone transplantation, analyze the origin cells of tumor regeneration, and carry out the basic research on the reconstruction of transplanted cells. CD34 positive cells were purified by normal bone marrow staining and cultured in liquid medium for 24-48 hours in the presence of hematopoietic factors. Neo resistant gene is contained in culture supernatant, culture supernatant and introduction efficiency. CD34 cells were transfected with DNA and the expression of DNA increased in the presence of hematopoietic factors at 24 hours of exposure and at 24 hours of supernatant coculture. The gene introduction rate of CFU-GM is 5.1-35.0% after 48 hours of hematopoietic factor culture and telecentricity. The HSV-TK gene is introduced into cells for GCV and used for gene therapy. GCV inhibits HSV-TK secretion, DNA synthesis inhibition activity, and gene introduction into cancer cells. The sensitivity of HSV-TK gene to GCV in transfected cells (TK-K562) was reduced to 1/10 of the maximum blood concentration when administered clinically. A party, like the non-introduced cells, GCV resistance. GCV treatment of non-introduced K562 and TK-K562, and identification of cell damage caused by TK-K562 and K562 The results of cell non-contact in soft weather, cell contact in liquid culture, cell to cell interaction TK gene introduction and GCV treatment are necessary for determining the viability of autotransplantation by purging method.