IDDMの遺伝子療法:自家骨髄移植による基礎インスリン補償

IDDM 的基因治疗：自体骨髓移植基础胰岛素补偿

• 批准号: 09877196
• 负责人: 花房 俊昭
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877196/
• 关键词: 遺伝子治療; 糖尿病; インスリン; 骨髄移植; レトロウイルス; プロインスリン; マウス

昨年度、1)マウスにおいて、human proinsulinはhuman insulinに対し1/50程度のbioavailabilityを保持することを明らかにし、2)ヒト膵組織より作製したpreproinsulincDNAのconstructを挿入したretrovirus vectorを作製し、producer細胞を得た。それに引き続き、今年度は、moloney白血病ウイルス由来のレトロウイルスベクターpGK,pRxにhuman insulinおよびコントロールのconstructを挿入して作成した、合計4種類のretrovirus vectorを、lipofection法を用いてpackaging細胞にtransfectし、G418によるselectionを行って、各々約20クローンのproducer胞株を樹立した。pGk vetorはNeO耐性遺伝子を持たないため、Neo遺伝子をもったplasmid vector(pRc/CMV)をco-transfectした。producer細胞の一部のcloneについてプロインスリン/インスリン抗体を用いた免疫染色を施行した。pGk vectorをtransfectしたproducer細胞では、挿入した配列よりimmunoreactive proinsulinが産生されることが確認された。また、培養上清のインスリン濃度をEIAL法により測定し、immunoreactive proinsulinの産生を確認した。

1) human proinsulin maintains 1/50th of its bioavailability; 2) human proinsulin cDNA constructs are engineered and producer. The construct of four types of retrovirus vector, lipofection method, packaging cell, transfect, G418 selection, and about 20 different producer cell lines were established. pGk vetor Neo resistant vector(pRc/CMV) A part of the clone of the producer cell was stained with antibodies. The pGk vector is transfected into the producer cell, and the immunoreactive proinsulin is produced. To determine the concentration of protein in culture supernatant and confirm the production of immunoreactive proinsulin by EIAL

项目成果

Yoshiuchi,I., et al.: "Mutation/polymorphism scanning of glucose-6-phosphatase gene promoter in non-insulin dependent diabetes mellitus patients." J.Clin.Endocrinol.Metab.in press. (1998)

Yoshiuchi,I. 等人：“非胰岛素依赖型糖尿病患者葡萄糖 6-磷酸酶基因启动子的突变/多态性扫描。”

Iwahashi,H., et al.: "Synergistic anti-apoptotic activity between Bc1-2 and SMN implicated in spinal muscular atrophy." Nature. 390. 413-417 (1997)

Iwahashi,H. 等人：“Bc1-2 和 SMN 之间的协同抗凋亡活性与脊髓性肌萎缩有关。”

Yoshiuchi I, et al.: "Three new mutations in the hepatocyte nuclear factor-1a gene in Japanese subjects with deabetes mellitus." Diabetologia. in press. in press (1999)

Yoshiuchi I 等人：“日本糖尿病受试者肝细胞核因子 1a 基因出现三种新突变。”

Yamamoto,K.et al.: "Differentiation of B-cells fromductal cells and acceleration of this process by nicotinamide." Biomed.Res.18,2. 171-178 (1997)

Yamamoto, K. 等人：“B 细胞与导管细胞的分化以及烟酰胺加速这一过程。”

Iwahashi.H, et al.: "Emerging therapeutic strategies in autoimmune diabetes:etiology, prediction, prevention and cure." Emarging Therapeutic Targents. in press. in press (1999)

Iwahashi.H 等人：“自身免疫性糖尿病的新兴治疗策略：病因学、预测、预防和治疗。”